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目的 1．采用改良的三袖套法吻合技术建立大鼠左肺原位移植模型，进一步增加动物模型的稳定性，提高手术成功率及术后存活率； 2．利用人白介素10（hIL10）的抗炎和免疫抑制特性，以大鼠同种异体左肺原位移植为动物模型，离体供肺经肺静脉灌注外源性hIL-10基因重组的腺病毒载体，探讨离体经肺静脉法转染目的基因的可行性，观察腺病毒介导hIL10离体转基因对移植肺IR损伤和急性免疫排斥反应的影响，并分析其可能的作用机制； 方法 1．通过对供肺获取、套管制作选用与套接技术等方面的改进，采用改良的三袖套法肉眼直视下完成供受体肺动脉、肺动脉和支气管的吻合。再灌注后4h，阻断右肺门，分别于阻断前及阻断后20分钟，经腹主动脉采血作血气分析，选择性测定移植肺功能；并分别于再植后4h、5d、14d三个时段通过影像学、病理组织学等手段，了解移植肺病理情况，评价该模型复制肺IR损伤和急性免疫排斥的能力； 2．以SD大鼠为供受体，改良的三袖套法建立大鼠左肺原位移植模型，左供肺获取后，基因转染组（D组）离体经肺静脉逆行灌注5×109 PFU hIL-10基因重组的腺病毒载体，10℃LPDG保存3hr后移入受鼠；空载体对照组（C组，n=7）灌注空白腺病毒载体；空白对照组（B组，n=7）灌注10℃ LPDG；并设假手术对照组（A组，n=7）；移植肺再灌注后4小时，测定指标。测定PaO2、干-湿重比率了解移植肺功能；检测丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶色检测（SOD）活性、髓过氧化物酶（MPO）活性;Rl’- PCR、免疫组化染hIL一10的表达情况:转染基因产物;酶联免疫吸附法免疫组化染色检测r1NF一。、IFN一Y、FaS、Fasl（ELISA）测定r1NF一a、IFN一Y的表达水平; 同时了解病理形态组织学改变及细胞凋亡情况。3.以wistar大鼠为供体、SD大鼠为受体，改良的三袖套法建立大鼠左肺原位 移植模型，左供肺获取后，基因转染组离体经肺静脉逆行灌注5x109 PFU hIL一10基因重组的腺病毒载体，10’CLPDG保存3hr后移入受鼠。移植后5d， 杀死受体鼠取样。Rl’- PCR、免疫组化染色检测hIL一10基因产物;免疫组化 染色检测工L2、TNF一Q、IFN一Y、FaS、Fasl的表达情况;酶联免疫吸附法 （EL工SA）测定ILZ、TNF一Q、IFN一Y的表达水平;同时测定排斥病理分级， 移植肺功能及细胞凋亡。 结果1.连续进行大鼠左肺原位移植正式实验30例，单人操作、肉眼完成，手术成 功率90%，14d的存活率达89%，移植物缺血时间（23士5）min，总手术操作时 间（58士9）min。影像学、病理组织学检查证实，再灌注4h和术后5d分别成 功地复制出了典型的肺IR损伤和急性免疫排斥反应变化;2.基因转染组再灌注后4小时，Rl’- PCR、免疫组化染色证实移植肺成功表达特 异性的hIL一10基因产物。与对照组比较，PaO:明显上升，W心比率降低， 差别有显著性意义（P<0.01）;MDA含量和MPO活性明显下降，SOD活性 明显升高（p<0.01）;TNF一a、IFN一Y、Fas及Fasl的表达量明显下降（p<0.01）; 基因转染组肺泡间质水肿明显减轻，炎细胞浸润减少，细胞凋亡减少;3.基因转染组移植后5d，移植肺仍有效表达特异性的hIL一10基因产物。与对 照组比较，PaOZ明显上升印<0.01)，急性排斥级别降低印<0.05);ILZ、诩F- 。、IFN一Y、Fas、FasL的表达量明显下降（p<0.01）;4.TUNEL检测发现，非基因转染组再灌注后4小时和移植后5d移植肺出现明显 的细胞凋亡，FaS/FaSL表达明显增强，而与非基因转染组比较，基因转染组 移植肺的细胞凋亡指数明显下降（P<0 .01）， Fas/FasL表达明显减弱（P<0.01）; 结论通过对传统的三袖套法吻合技术进行许多的改进，成功地建立大鼠左肺原位移植模型，无需显微外科吻合技术，整个手术过程在单人操作、肉眼直视下完成，手术成功率高，模型稳定，可复制性高，经济实用，是适合肺保存、肺移植缺血再灌注损伤、肺移植免疫排斥等系列研究的理想动物模型;离体供肺经肺静脉灌注法转染外源性目的基因是有效可行的;腺病毒载体介导h工L10转基因能有效地抑制移植肺IR损伤，改善了早期移植肺功能;腺病毒载体介导h工L10转基因有效地抑制了同种异体肺移植的急性免疫排斥反应，诱导局部的免疫抑制状态，改善了移植肺气体交换功能:FaS系统介导的凋亡在肺IR损伤和同种异体肺移植的急性免疫排斥反应过程中起着一定的作用，可能参与hlL10转基因治疗移植肺IR和急性排斥的机制。