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第一部分miR-122对IFN-α抗HCV效应的影响目的：探讨miR-122对α-干扰素(IFN-α)抗丙型肝炎病毒(HCV)效应的影响。方法：1.给感染HCV的Huh7.5.1予miR-122模拟物(20nmol/L.100nmol/L.400nmol/L)和(或)IFN-α(1000IU/m1)处理,采用荧光定量PCR检测HCV RNA水平。2.给Huh7.5.1细胞感染不同数量HCV(107拷贝,106拷贝,105拷贝)和(或)IFN-α处理,荧光定量PCR检测HCV RNA水平。结果：1. IFN-α以时间依赖方式抑制HCV复制,在48h时使HCV RNA下降了83%。miR-122模拟物呈剂量依赖性促进HCV RNA复制(P<0.05)。2. IFN-a的抗病毒效应与miR-122模拟物水平(20nmol/L.100nmol/L.400nmol/L)成反比,与对照组比较有显著性差异(73.3%±3.5%,64.67%±5.5%,56.33%±5.1%vs84%±4.5%,P<0.05或P<0.01)。3. IFN-α的抗病毒效应与HCV载量呈反比(105拷贝组vs107拷贝组,P<0.05)。结论：在细胞感染模型中,miR-122促进HCV的复制,并且,miR-122可能通过影响HCV载量而间接影响IFN-α的抗病毒效应。目的：利用HCV细胞感染模型和HCV CORE融合表达质粒转染细胞模型,探讨HCV病毒和CORE蛋白对miR-122表达水平的影响。方法：1.Huh7.5.1细胞感染2×10‘拷贝/ml HCV32天,荧光定量PCR检测Huh7.5.1细胞内HCV RNA和miR-122的表达水平。2.Huh7.5.1细胞感染不同拷贝数HCV(105拷贝,106拷贝,107拷贝and108拷贝),荧光定量PCR检测细胞内miR-122水平。3.Huh7.5.1细胞转染不同数量(0.5μg,1μg,2μg质粒pEGFP-core(表达GFP-HCV core protein融合蛋白)或阴性对照质粒pEGFP,检测Huh7.5.1细胞内miR-122水平及感染HCV后各组细胞内HCV RNA水平；或转染同一浓度(1.5μg)的质粒pEGFP-core或阴性对照质粒pEGFP后,在不同时间点(24h,48h,72h)检测Huh7.5.1细胞内miR-122水平。结果：1.在感染初期,随着HCV载量增加,miR-122水平轻微上升；在感染第19天,HCV载量继续增加,而miR-122水平开始急剧下降,在第32天时降至原来水平的50%。2.与未感染HCV的control组相比,105组中miR-122水平升高,108组中miR-122水平明显下降,降至对照组的67%(P<0.05)。3.与未转染的control组相比,转染质粒pEGFP-core的Huh7.5.1细胞内miR-122呈时间和剂量依赖效应下降(P<0.05或P<0.01),并且其对HCV的感染力明显下降(P<0.01),而转染质粒pEGFP的Huh7.5.1细胞内miR-122水平及对HCV感染力无明显变化。结论：HCV核心蛋白下调miR-122水平可能为HCV持续感染和免疫逃避的另一机制。