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目的:细胞因子在牙周组织破坏机制中具有重要的免疫调节作用和直接介导作用。本实验采用酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA)试验对健康人龈沟液(gingival crevicular fluid,GCF)以及慢性牙周炎患者牙周基础治疗前后龈沟液中肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)和白细胞介素-1β(interleukin-1 beta, IL-1β)的含量进行检测,分析龈沟液中HGF和IL-1β的含量变化规律与临床各项指标之间的关系,为探讨龈沟液中HGF和IL-1β与牙周炎的关系以及HGF和IL-1β能否作为反映牙周状况的有利指标提供依据;并探讨HGF和IL-1β在牙周炎发病机制、病情进展等方面所起的作用。方法1 病例选择:在2002年9月至2003年9月期间, 从河北医科大学第二医院口腔内科门诊患者中选择自愿参加本研究的慢性牙周炎患者12名,其中男7名(31-43岁),女5名(35-45岁)。平均年龄40.5岁。要求牙周探诊深度(PD)≥4mm,牙龈指数(GI)≥1,附着丧失(AL)≥2mm。从每位患者口腔中选择2~4个不相邻牙周位点,所取位点均为单根牙近中唇侧,共35个位点。再随机选取15名牙周健康者,男8名(28~35岁),女7名(26~31岁),平均年龄31.75岁。从每人口腔中选取1个健康牙周位点。要求牙周探诊深<WP=4>度(PD)<2 mm,牙龈指数(GI)为0,附着丧失(AL)为0。所取位点均为单根牙近中唇侧,共15个位点。要求所有研究对象没有系统性疾病。在检查前至少6个月内未接受过牙周治疗,3个月内未服用过抗生素,免疫调节剂、避孕药等。妇女未妊娠。实验分为两组,对照组和实验组。2 GCF样本的收集及测量 :用滤纸条浸润法收集GCF样本并定量和贮存,取样后记录牙龈指数(GI),探诊深度(PD)和附着丧失(AL)。每个指标用两条滤纸,每个位点用4条滤纸,每条滤纸的测量间隔1分钟。测量前将两条滤纸放入Eppendorf(EP)管中用电子天平测量其重量。隔湿取样牙,轻轻吹干牙面,将已裁好的滤纸条(2mm×8mm)轻轻插入牙周袋,直至遇有轻微阻力为止。置30秒后取出。如滤纸条沾有血则弃去不要。将两条滤纸作为一个样本放入EP管中,用电子天平称重后再按比重为1毫克/微升换算为体积。将装有滤纸条的微离心管用锡纸包好立即放入-70℃的冰箱中。然后对患者行全口洁治及取样牙位刮治并作口腔卫生指导等基础治疗。洁刮治均由同一名有经验的临床医师完成。取样牙位治疗后4周复查,重复前述步骤。3 HGF的检测:取样完成后,将保存GCF的样本集中测定,取出待测样本及试剂盒平衡至室温,用稀释后的相应的分析缓冲液(Calibrator Diluent RD6X)洗脱滤纸条上的GCF。在每个EP管中加入60微升缓冲液,旋转混合萃取,用1500转/分的离心机离心3分钟,备用。其中的50微升用于分析。分析过程严格按照试剂盒所附说明进行操作。HGF检测值可通过酶标仪所显示的标准曲线读出。IL-1β的检测:将受检样本及试剂盒平衡至室温后,在装<WP=5>有GCF样本的EP管中加入110微升标准品稀释液,用1500转/分的离心机离心3分钟洗脱滤纸条上的GCF。然后用移液管取出100微升加入相应的反应板中用于分析。分析过程严格按照试剂盒所附说明进行操作。结果:HGF总量及浓度在治疗前牙周炎位点是健康位点的4.78倍和1.24倍。IL-1β总量及浓度在治疗前牙周炎位点是健康位点的4.47倍和1.22倍。HGF总量及IL-1β总量在治疗前牙周炎位点明显高于健康位点,差异有显著性意义(P<0.01)。而HGF浓度及IL-1β浓度在治疗前牙周炎位点也高于健康位点,但其差异无显著性意义(P>0.05)。经牙周治疗后,牙周检测指数与GCF体积均有明显改善,且差异有显著性意义(P<0.01)。HGF总量及IL-1β总量在治疗后均明显减少,且差异有显著性意义(P<0.01)。HGF浓度及IL-1β浓度在治疗后也减少但其差异无显著性意义(P>0.05)。HGF总量及IL-1β总量与探诊深度(PD)、牙龈指数(GI)、附着丧失(AL)、龈沟液 (GCF) 体积均有显著相关性。HGF浓度与GCF呈明显相关关系,与GI有弱相关性,而与PD、AL无相关性。IL-1β浓度只与GCF呈明显相关关系,而与GI、PD、AL无相关性。HGF总量与IL-1β总量;HGF浓度与IL-1β浓度均呈明显相关关系。结论1 牙周炎患者龈沟液中存在HGF与IL-1β,并且其含量明显高于牙周健康者,这两种细胞因子在牙周炎的发生发展中起一定作用。2 经牙周基础洁刮治后,龈沟液中HGF与IL-1β水平明显<WP=6>降低并且其下降水平与牙周炎症缓解程度相一致。龈沟液中HGF与IL-1β水平与牙周炎症程度密切相关。龈沟液中HGF与IL-1β水平可作为反映牙周状况的有利指标。