论文部分内容阅读
目的:高乌甲素（LA）是高乌头的主要活性成分之一。LA具有镇痛、抗炎、局部麻醉和降低体温的特点,胶质细胞诱导的脊髓神经炎症应答在慢性疼痛中的发生、发展和维持起重要作用,但是LA能否通过抑制神经炎症反应来缓解慢性炎症性疼痛未见报道。本课题主要探讨注射LA对慢性炎症性疼痛的预防和治疗作用,研究LA对完全弗氏佐剂（CFA）诱导的大鼠脊髓神经胶质细胞的体外和体内水平的影响,信号通路和转录因子的激活以及炎性因子和趋化因子表达的影响,进一步研究LA在慢性炎症性疼痛的作用及相关机制。方法:（1）正常SD大鼠通过腹腔注射不同浓度LA（2 mg/kg,10 mg/kg）和生理盐水,用热辐射刺激和机械刺激,观察正常大鼠痛敏行为基础值的影响。（2）LA预处理组:对SD大鼠足底注射完全弗氏佐剂（CFA）前1天开始,分别腹腔注射LA（2 mg/kg,10 mg/kg）和生理盐水,每天测量小鼠的机械触觉疼痛和热痛觉过敏行为,连续5天。（3）后处理组:CFA单侧足部注射后第二天,注射LA（2 mg/kg,10 mg/kg）和生理盐水,每天测试大鼠的热辐射刺激和机械刺激疼痛,连续5天。（4）LA预处理实验最后一次注射LA后取大鼠脊髓腰膨大L4-5段,通过Q-PCR、Western blotting、免疫荧光检测高乌甲素对大鼠脊髓星胶细胞标志物GFAP（胶质纤维酸性蛋白）和小胶细胞标记物OX-42（小胶细胞特异性蛋白）表达的影响。（5）采用Q-PCR检测LA预处理对大鼠的炎症因子和趋化因子表达影响。（6）Q-PCR、Western blotting、免疫荧光法检测LA处理组对LPS诱导的原代小胶质细胞中炎症因子,趋化因子和NF-κB通路的影响。结果:（1）LA（2mg/kg,10mg/kg）和生理盐水对SD大鼠的热痛觉阈值和SD大鼠机械触痛觉阈值没有影响;LA预处理可减轻由CFA诱导的SD大鼠机械性疼痛和热过敏疼痛。（2）LA预处理可降低CFA诱导的大鼠脊髓OX-42的表达,不能降低CFA诱导的大鼠脊髓GFAP的表达;LA预处理减少CFA诱导的大鼠脊髓炎症相关因子TNF-α（肿瘤坏死因子）、IL-1β（白细胞介素-1β）、IL-6（白细胞介素-6）,趋化因子KC（角质细胞起源趋化因子）、MCP-1（单核细胞趋化因子1）、MIP-1α（巨噬细胞炎性蛋白1α）等的表达。（3）原代小胶质细胞与LA的预孵育显著抑制LPS诱导的炎症相关因子IL-1β、TNF-α、IL-6,趋化因子KC、MCP-1、MIP-1α的表达;LA通过抑制细胞中的NF-κB途径降低LPS诱导中炎症和趋化相关因子的表达。结论:（1）动物实验结果显示LA预处理组镇痛效果优于后处理组。（2）LA可降低大鼠脊髓和血清中CFA诱导的炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）和趋化因子（KC、MCP-1、MIP-1α）的表达,高剂量组LA显示更显著的差异。（3）无论是动物实验还是细胞实验均显示,LA能有效抑制小胶质细胞的激活（p<0.05）,但对星形胶质细胞没有显著抑制现象。（4）LA可能是通过抑制NF-κB通路,进而降低炎性因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）和趋化因子（KC、MCP-1、MIP-1α）的表达,起到炎症性疼痛的缓解效果。