【摘 要】
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在高等真核生物中,胞嘧啶内碳5(C5)位置的甲基化是最常见的DNA修饰,主要发生在CpG二核苷酸上。CpG岛甲基化是一种重要的表观遗传标记,并且在发育与分化、基因组稳定性、基因组印记和X染色体失活等方面起着关键作用。CpG岛的异常甲基化与包括癌症在内的多种疾病相关。DNA甲基化的发生主要依赖于DNA甲基转移酶(DNMT)的活性。目前检测CpG甲基转移酶的方法包括荧光法、单分子检测法、表面增强拉曼散
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在高等真核生物中,胞嘧啶内碳5(C5)位置的甲基化是最常见的DNA修饰,主要发生在CpG二核苷酸上。CpG岛甲基化是一种重要的表观遗传标记,并且在发育与分化、基因组稳定性、基因组印记和X染色体失活等方面起着关键作用。CpG岛的异常甲基化与包括癌症在内的多种疾病相关。DNA甲基化的发生主要依赖于DNA甲基转移酶(DNMT)的活性。目前检测CpG甲基转移酶的方法包括荧光法、单分子检测法、表面增强拉曼散射法、表面等离子体共振法、电化学法和电化学发光法。我们首次构建了一个具有传感能力的单个量子点(QD)纳米传感器,能够对甲基胞嘧啶位点进行特异性识别,实现对M.SssI甲基转移酶活性的灵敏定量检测。我们设计了含有5’-G-C-G-mC-3’/3’-mC-G-mC-G-5’位点的双链DNA(dsDNA)底物,其末端用生物素/磷酸盐修饰。在M.SssI甲基转移酶的存在下,dsDNA被甲基化并被GlaI核酸内切酶切割,产生两个带有游离3’-OH末端的dsDNA片段。在末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的辅助下,多个Cy5-dATP依次将添加到dsDNA片段的3’-OH末端,得到生物素/多个Cy5标记的dsDNA片段。随后,dsDNA片段可以在链霉亲和素包被的QD的表面组装,形成QD-dsDNA-Cy5纳米结构,产生由QD到Cy5的荧光共振能量转移(FRET)。Cy5的发射信号可通过单分子检测法定量分析。单分子检测法与量子点的结合赋予了该纳米传感器极高的灵敏度。该纳米传感器的最低检测限为2.1×10-7 U/μL,并且具有良好的选择性。它可以进一步用于DNA甲基转移酶抑制剂的筛选和复杂的生物样品分析,在临床诊断和药物研发中具有潜在应用价值。
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