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第一部分miR-19a、miR-19b在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义目的研究miR-19a、miR-19b在儿童急性淋巴细胞白血病（ALL,简称急淋）中的表达及其与急淋临床特征的关系。方法采用实时定量PCR的方法检测67例儿童急淋（初诊38例、完全缓解20例、难治复发9例）骨髓单个核细胞中miR-19a、miR-19b的表达，分析其表达量与临床特征的关系。动态观察同时收到初诊和完全缓解标本的6例急淋患儿初诊及完全缓解后骨髓中miR-19a、miR-19b的表达变化。15例原发性免疫性血小板减少症（ITP）患儿作为对照。结果1. miR-19a在急淋初诊组、完全缓解组、难治复发组和对照组的表达量分别为2.69±0.39，0.69±0.12，5.17±1.79和0.36±0.08。miR-19a在急淋各组中的表达量显著高于对照组（P<0.05）。急淋各组中，初诊及复发难治组的表达量显著高于完全缓解组（P<0.05）。 miR-19b在初诊组、完全缓解组、难治复发组和对照组的表达量分别为3.29±0.51，0.81±0.14，6.24±0.79和0.49±0.07。初诊组和难治复发组的表达量显著高于完全缓解组和对照组（P<0.01），而完全缓解组与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。2.动态观察同时收到初诊和完全缓解标本的6例急淋患儿初诊及完全缓解后骨髓中miR-19a、miR-19b的表达变化。初诊时miR-19a、miR-19b表达量分别为1.66±0.24、2.24±0.21，完全缓解后表达量分别为0.65±0.02、0.77±0.06，完全缓解后miR-19a、miR-19b表达量较初诊时显著降低（P<0.05）。3. miR-19a、miR-19b高表达与外周血高白细胞计数（≥50×109/L）、危险度分型（中高危）、脾肿大有相关性（P<0.05）；与发病年龄、性别、免疫分型、形态学分型、肝及淋巴结肿大、早期泼尼松反应等因素无相关性（P>0.05）。4. miR-19a表达量与BCR-ABL、MLL-AF4融合基因阳性无相关性（P>0.05）；miR-19b与BCR-ABL融合基因阳性有相关性（P<0.05），与MLL-AF4融合基因阳性无相关性。5. miR-19a与miR-19b在儿童急淋各组及对照组中的表达趋势相近，二者表达量具有正相关性（r=0.582，P<0.05）。结论1. miR-19a、miR-19b在儿童急淋初诊和难治复发组中存在高表达，完全缓解后表达量显著降低，miR-19a、miR-19b高表达可能促进了儿童急淋的发生发展。2. miR-19a、miR-19b高表达与外周血高白细胞计数（≥50×109/L）、危险度分型（中高危）、脾肿大有相关性；与发病年龄、性别、免疫分型、形态学分型、MLL-AF4融合基因阳性、肝及淋巴结肿大、早期泼尼松反应等因素无相关性，miR-19b高表达与BCR-ABL阳性有相关性。miR-19a及miR-19b可能成为判断急淋预后危险因素的又一参考指标。3. miR-19a与miR-19b在儿童急淋各组及对照组中的表达趋势相近，二者表达量具有正相关性，二者可能功能相近并协同作用参与儿童急淋发生发展。第二部分miR-19b对Jurkat细胞增殖及PTEN表达的影响研究目的抑制miR-19b在Jurkat细胞中的表达，探讨miR-19b对Jurkat细胞增殖及对PTEN表达的影响。方法1.采用实时荧光定量PCR的方法检测Jurkat、HL-60、K562、HEK293细胞株中miR-19a及miR-19b的表达，筛选高表达miR-19a及miR-19b的细胞株。2.采用经过特殊化学修饰的miR-19b特异性拮抗剂antagomir转染Jurkat细胞。实验分为三组：实验组（miR-19b特异性antagomir转染组）、阴性对照转染组（antagomir阴性对照转染组）、空白对照组（未加转染试剂的Jurkat组）。3.采用实时定量PCR的方法检测各组miR-19b及PTEN mRNA的表达量。4.采用MTT法检测Jurkat细胞的增殖。结果1. miR-19a在Jurkat、K562、HL-60、HEK293细胞中的表达量分别为15.2±0.37，3.32±0.22，1.27±0.20和1.53±0.26；miR-19b在四组细胞中的表达量分别为6.91±0.08，3.41±0.42，1.31±0.13和0.96±0.13；PTEN在四组细胞中的表达量分别为0.39±0.01，0.67±0.007，3.62±0.41和0.94±0.20。miR-19a、miR-19b在Jurkat细胞中的表达量显著高于HL-60、K562和HEK293细胞（P<0.05），PTEN在Jurkat细胞中的表达量显著低于HL-60、K562、HEK293细胞（P<0.05）。2.miR-19b特异性拮抗剂antagomir转染Jurkat细胞，miR-19b在实验组、阴性对照转染组、空白对照组的表达量依次为1.87±0.09，6.67±0.31和6.88±0.25。实验组较阴性对照转染组和空白对照组显著降低，差异有统计学意义（P<0.01），而阴性对照转染组和空白对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。3. PTEN mRNA在实验组、阴性对照转染组、空白对照组的表达量依次为2.72±0.26，0.39±0.02和0.39±0.01。实验组较阴性对照转染组和空白对照组显著升高，差异有统计学意义（P<0.01），而阴性对照转染组和空白对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。4. miR-19b特异性拮抗剂antagomir转染后Jurkat细胞的增殖能力显著降低（P<0.01）。结论1．不同的细胞株miR-19a、miR-19b的表达存在差异，miR-19a、miR-19b在Jurkat细胞中的表达量显著大于K562、HEK293HL-60中的表达量。PTEN在Jurkat细胞中的表达量显著低于其它三种细胞。2．经过特殊化学修饰的miR-19b特异性拮抗剂antagomir可以成功转染Jurkat细胞株，并显著下调miR-19b的表达。3．随着miR-19b表达的下降，Jurkat细胞中PTEN mRNA的表达量显著上调，证明miR-19b的表达同PTEN mRNA的表达密切相关。4．随着miR-19b表达的下降Jurkat细胞的生长受到明显的抑制，miR-19b可能通过促进细胞恶性增殖导致白血病发生发展。