【摘 要】
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EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)感染与多种上皮细胞和淋巴系统恶性肿瘤密切相关,如鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)、布氏淋巴瘤(Burkitts Lymphoma,BL)、何杰金病(Ho
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EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)感染与多种上皮细胞和淋巴系统恶性肿瘤密切相关,如鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)、布氏淋巴瘤(Burkitts Lymphoma,BL)、何杰金病(Hodgkins Disease,HD)以及免疫缺陷病人的恶性淋巴瘤等.在鼻咽癌中,EBV仅仅选择性地稳定表达几种潜伏期的核抗原和膜蛋白:核抗原1(nuclear antigen 1,EBNA1)、潜伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)和潜伏膜蛋白2(latent membrane protein 2,LMP2).然而LMP1能使人B细胞和上皮细胞恶性转化.因此该文将LMP2(以下简写为P2)和EBNA1(以下简写为E1)作为研究基于细胞免疫的鼻咽癌治疗性蛋白疫苗的靶抗原.考虑到全长的LMP2蛋白可能难以表达,除了克隆含有全长LMP2编码序列的基因片段(LMP2)之外,还制备了亚克隆基因片段(P2-251、P2-254和P2-345).对于EBNA1,绕开蛋白中的Gly-Ala重复序列,分别克隆基于蛋白N末端和C末端编码序列的基因片段(E1-169和E1-564).此外,为了利用炭疽毒素致死因子LFn/Δ3片段的投递功能,将上述抗原基因片段与LFn/Δ3融合,利用pET15b表达质粒在大肠杆菌宿主BL21(DE3)pLysS和BL21(DE3)Codon Plus中进行表达尝试.获得了LFn P2-251、Δ3 P2-251、LFn E1-169、Δ3 E1-169、LFnE1-564和Δ3 E1-564等重组融合蛋白的表达,并进行了Western-Blotting检测和蛋白的小规模纯化,为进一步的疫苗研究奠定了基础.
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