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生物防治是植物寄生线虫防治的研究热点,生防真菌筛选及活性验证是其中重要的一个环节。本研究在前期研究的基础上,系统的研究了生防真菌的筛选体系、活性验证、高活性菌株发酵时间和发酵液稀释倍数优化以及生防菌株的种类鉴定,包括根结线虫卵表面消毒的方法、获取高孵化率根结线虫卵的最佳取样时间、供试生防真菌对南方根结线虫(Meloidogyne incongnita)、松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)、大豆孢囊线虫(Heterodera glycines)毒杀活性的室内筛选、生防菌株XN-2、XO-2、CLR-3、CQE-4和FCE-2处理线虫卵或J2后的侵染能力和繁殖能力的室内盆栽试验、生防菌株XN-2、XO-2、CLR-3、CQE-4和FCE-2杀线活性最佳发酵条件的优化,以及具有生防潜力9株真菌的形态学和分子生物鉴定。具体研究结果如下:1.建立植物寄生线虫生防真菌筛选体系,并筛选出对根结线虫、松材线虫和大豆孢囊线虫有作用的生防菌株。利用70%酒精对根结线虫卵表面消毒,消毒彻底,其孵化率与无菌水对照相比没有显著差异(P<0.05)。根结线虫卵最佳取样时间为在接种线虫卵后第28 d至38 d之间。研究发现,XO-2和CLR-3菌株发酵液对根结线虫卵孵化率有明显的抑制作用,XN-2、FCH-1、CLK-2、FCD-2、CLS-2、CLR-1和XS-5菌株处理根结线虫卵孵化率显著低于无菌水对照(P<0.05)。XO-2菌株发酵液显著抑制大豆孢囊线虫卵孵化(P<0.05),FCD-2、CLS-2、CLR-1、FCH-1、CLK-2、XI和CLR-3菌株发酵液处理的卵孵化率均显著低于无菌水对照(P<0.05)。CLQ-3、CLV-2、XN-2、CQE-4、CLK-2和FCE-2菌株发酵液10倍稀释液处理根结线虫J2 72 h击倒率均高于90%,其中XN-2和FCE-2在处理72 h后J2的死亡率均为100%,且FCE-2菌株发酵液处理24 h后J2全部死亡。菌株FCC-4、CLV-2、XI、XN-2、CQE-4、CLK-2和XK-1的发酵液2倍稀释液处理松材线虫72 h被全部击倒,其中XN-2和CQE-4两个菌株处理死亡率达到100%,FCC-4、CLV-2、XI、CLK-2和XK-1菌株处理死亡率分别为98.81%、87.53%、97.82%、98.41%和88.07%;稀释5倍条件下XI、XN-2、CQE-4和CLK-2菌株处理72 h对松材线虫击倒率均达100%,且死亡率均高于90%;稀释10倍条件下,仅XI、CLK-2和XN-23个菌株对松材线虫有较高的毒杀活性,分别为91.53%、93.73%和76.05%。2.生防菌株发酵液活性的盆栽验证研究结果表明,XN-2和XO-2两个菌株发酵液对根结线虫卵孵化抑制效果较好,根结数量和卵粒数均显著低于无菌水对照,且对番茄植株生长没有影响。CQE-4菌株对根结线虫J2毒杀效果最好,根结数平均为2.3个,均显著低于无菌水对照(P<0.05),其次是FCE-2菌株。3.生防菌株对根结线虫卵孵化抑制和J2毒杀活性的发酵时间和发酵液稀释倍数优化将上述筛选中对根结线虫作用效果明显的5个菌株进行发酵时间和发酵液稀释倍数优化,试验结果表明,XO-2和XN-2菌株发酵2周发酵液根结线虫卵孵化率低于发酵1周和3周发酵液,XO-2菌株发酵液处理中死亡的卵和J2 60%出现虫体被降解的现象。CLR-3菌株在发酵1周时,5倍、10倍和20倍稀释液根结线虫卵孵化率均低于10%,显著低于无菌水对照(P<0.05),但在2倍稀释液下孵化率为53.67%,稀释30倍和40倍发酵液处理的卵孵化率分别为18.71%和34.66%,显著低于无菌水对照(P<0.05),高浓度下抑制率降低,这种现象有待进一步研究证实。XN-2菌株发酵液在发酵1周和2周时,高浓度(2倍、5倍和10倍稀释液)下对线虫毒杀活性均为100%,发酵1周和2周时20倍稀释液处理根结线虫J2死亡率分别为90.54%和99.56%,显著高于发酵3周发酵液56.16%(P<0.05)。发酵3周时10倍稀释液死亡率为96.03%;CQE-4在发酵2周和3周时,2倍、5倍、10倍和20倍稀释液处理72 h死亡率均达到100%,均显著高于发酵1周死亡率(P<0.05)。FCE-2菌株发酵后在4℃处理4周对线虫有更好毒杀作用,发酵3周毒杀效果优于发酵1周和2周发酵液,且在发酵3周时,2倍稀释处理2 h后线虫即被全部击倒并死亡,6 h部分线虫的虫体被降解,12 h时线虫的虫体均出现降解,2倍、5倍和10倍稀释液处理12 h线虫死亡率均达到100%,发酵3周的发酵液2倍、5倍和10倍对线虫有降解作用,稀释倍数大于20倍对线虫毒杀作用减弱。4.生防菌株的种类鉴定结合各菌株的形态学和分子生物学鉴定,CLR-1鉴定为哈茨木霉(Trichoderma harzianum),CLR-3和XI均被鉴定为微紫青霉菌(Penicillium janthinellum),CLS-2鉴定为哈茨木霉(Trichoderma harzianum Hypocrea lixii),CLV-2鉴定为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),CQE-4鉴定为疣孢漆斑菌(Myrothecium verrucaria),FCE-2鉴定为日本曲霉(Aspergillus japonicus),XN-2鉴定为链格孢(Alternaria spp.),XO-2鉴定为黑曲霉(Aspergillus niger)。