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TFEB属于亮氨酸拉链bHLH-LZ (basic-helix-loop-helix leucine zipper)类转录因子中的MiTF/TFE (microphthalmia-transcription factor E)家族成员,参与调控许多重要的细胞生理过程。早期研究表明,TFEB在胎盘血管新生、肾癌以及免疫中发挥重要功能。最近的研究表明,TFEB是调控溶酶体合成和细胞自噬的关键转录因子。此外,TFEB能够正向调控体内脂类代谢。越来越多的研究表明,TFEB在细胞应激性、代谢等生命活动过程中发挥越来越重要的作用。因此,对TFEB蛋白本身的分子机理研究对揭示其更重要的生物学作用有重要意义。穿梭蛋白是能够在细胞质和细胞核之间相互穿梭的,在细胞内具有重要功能的一种蛋白,如P-catenin, SMAD2, SMAD3等。这种蛋白的穿梭是通过核孔复合体进行。同时,穿梭蛋白的转运需要一些蛋白的协助。当蛋白入核时,一种被称为importin的蛋白能够识别穿梭蛋白的入核序列(Nuclear Localization Signals, NLSs),同样,当穿梭蛋白出核时,一种被称为export in的蛋白能识别穿梭蛋白的出核序歹(Nuclear Export Signals, NES),从而协助蛋白的出核转运。Leptomycin B (LMB)是一种出核转运抑制剂,能够和染色体区域稳定蛋白1(Chromosome Region Maintenancel, CRM1)结合,从而抑制CRM1和含有NES序列的蛋白结合,从而抑制CRM1介导的出核转运。研究表明,TFEB在241和252位氨基酸之间有典型的NLS序列,若此序列发生突变,则TFEB不能发挥正常入核的功能。TFEB在饥饿或哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian Target of Rapamycin, mTOR)受到抑制的情况下能够入核发挥转录功能,但TFEB是否是穿梭蛋白以及是否存在NES序列还不清楚。在本研究中,我们证明了TFEB是一种穿梭蛋白。TFEB在LMB的作用下能够入核。和mTORCl抑制剂Torinl不同,LMB完全促进TFEB入核。TFEB的N端对其的细胞质定位很重要。LMB虽然能够促进TFEB的核定位,但是LMB并不抑制mTORCl的活性和TFEB的磷酸化,也不影响TFEB和14-3-3的结合。进一步研究表明,LMB对TFEB定位并不依赖于Ras相关鸟苷三磷酸酶(Ras-related GTPase, Rag GTPase)定位,但减弱了TFEB和Rag GTPase的结合。LMB促进TFEB入核的机制可能是通过N端的NES。综上,本研究证明TFEB作为一种穿梭蛋白,其定位在LMB的作用下入核。LMB不影响与TFEB有关的通路,同时,TFEB也能在磷酸化状态下存在于细胞核中。但是LMB促进TFEB入核的功能是本研究中尚未研究清楚的问题。