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鸭卵黄免疫球蛋白IgY作为一种特异性抗体，既具有哺乳类IgG的生物活性，又具有许多较哺乳类IgG更为优越的特点。在我国，鸭病毒性肝炎是危害养鸭业最严重的疾病之一。本文主要通过对鸭肝炎病毒的分离，纯化，免疫种鸭获得抗鸭肝炎病毒卵黄抗体，并对其分离纯化条件进行探索和对IgY某些稳定性进行试验研究，建立了检测鸭肝炎抗体的Dot—ELISA方法。获得如下结果： 1．抗鸭肝炎病毒卵黄抗体的制备 1．1 采用标准DHV-Ⅰ毒株(ATCC株)，接种鸭胚增殖病毒，氯仿抽提，PEG浓缩，差速离心得到较纯的鸭肝炎抗原(浓缩50倍)。蛋白含量为18.75mg／ml，能用于种鸭的免疫和酶标板的包被。 1．2 通过乳化鸭肝炎病毒，经安全检验制备的鸭肝炎疫苗，按免疫程序进行种鸭免疫，两个月后测定血清抗体活性达到1：128时，拾取种蛋，以为后续研究提供材料。 2．采用水稀释法制备鸭卵黄水溶液，对水稀释法的几种条件进行优化 2．1 确定pH5.1是从稀释鸭卵黄液里分离抗体的最适pH，低于pH5.1时会引起抗体溶解度的下降，高于pH5.1时则不利于脂质的沉淀。 2．2 确定1：10为稀释鸭卵黄液的最佳稀释倍数。在制备鸭卵黄水溶液的过程中，随着稀释倍数的增加，离心上清液中蛋白质含量逐渐上升，而脂肪的含量则呈下降趋势，当稀释倍数达到1：10后，上清液中的蛋白质含量和脂肪含量基本趋于一致。 2．3 确定稀释后的鸭卵黄水溶液至少应放置6小时，上清液的澄清度较好，脂蛋白的沉积量达到最大：增长放置时间，上清液没有明显变化。 3．抗鸭肝炎病毒卵黄抗体的分离纯化 3．1 通过两种盐析方法的比较，确定辛酸—硫酸铵法为比较适合鸭卵黄抗体的粗提方法。 3．2 通过离子交换层析，凝胶过滤层析将鸭的完整型IgY和缺失型IgY(△Fc)成功分开，确定离子交换层析时用0.02mol／L Tris-HCl缓冲液平衡，洗脱时流速为1.0ml／min；凝胶过滤层析时用0.02mol／L PBS平衡，洗脱时流速为0.1ml／min。 4．高纯度抗鸭肝炎病毒卵黄抗体间接ELISA试验条件的优化 4．1 确定鸭肝炎抗原浓度定为16μg／ml：当抗原浓度为4μg／ml时，检测OD值己达到0.519，当浓度达16μg／ml时，已稳定在ELISA检测峰值。 4．2 确定一抗(抗鸭肝炎病毒卵黄抗体)浓度定为28μg／ml：当一抗浓度逐渐增加时，OD值从增加到趋向稳定，在2μg／ml到25μg／ml的浓度范围内，OD值随一抗浓度的增加呈线性增加，在16μg／ml到32μg／ml的浓度范围内，OD值随一抗浓度的增加稍有增加，浓度在32μg／ml以上，OD值趋于稳定，本试验选择一抗用量为28μg／ml。 4．3 确定酶标羊抗鸭IgG的稀释度为1：3200。随着酶标羊抗鸭gG稀释倍数的增加，OD值逐渐下降，尤以3200倍稀释度到6400倍稀释度时下降最为明显。所以，从节约酶标抗体和试验检测水平所需的最低酶标抗体量出发，选择酶标抗体的稀释度为1：3200。 5．高纯度抗鸭肝炎病毒卵黄抗体在几种条件下的稳定性试验