高脂质含量小球藻的选育及脂质合成相关基因表达的研究

来源 :黑龙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhaoliping1984
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化石能源的日渐枯竭以及燃烧化石燃料导致温室效应的日趋严重,促使人们将开发可再生能源作为当前研究的重点,而以微藻为原料制备生物柴油也成了近些年人们研究的热点。本研究采用诱变育种的方法选育脂质积累和生物量积累相对平衡的藻株,为解决生物柴油产业化的瓶颈问题提供优质藻株,还能提供生物柴油产业发展的理论依据和试验依据。本研究利用物理诱变(紫外线)方法和化学诱变(EMS)方法对小球藻(Chlorella vulgaris)进行育种工作,筛选出脂质合成和生长较为平衡的藻株,并采用Plant ELISA KIT酶活检测试剂盒对脂质合成关键酶乙酰辅酶A羧化酶(acetyl coA carboxylase,ACC)、二酰甘油酰基转移酶(diacylglycerol acyltransferase,DGAT)、乙酰辅酶A合成酶(acyl-coenzyme A synthetase,ACS)、3-磷酸甘油脱氢酶(glycerol3-phosphate dehydrogenase,GPDH)、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC)、二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose pyrophosphorylase,AGPase)和光合作用关键酶景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶(sedoheptulose-1,7-bisphosphatase,SBPase)及核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶(ribulose bisphosphate carboxylase,Rubisco)进行酶活性检测,并对脂质合成关键酶acc基因mRNA表达水平进行检测。结果筛选出高脂质含量突变株C02,其脂质含量增加了44.0%,高生物量积累突变株C06,其比生长速率提高了107.93%,以及高生物量富油突变藻株E33,其脂质含量增加了63%,比生长速率提高了1.39%。检测小球藻HD01、突变株C02和突变株C06中脂质合成和光合作用关键酶活性,发现酶活性均随着培养时间的延长而逐渐下降,第4天至第8天为酶活变化的关键时期。小球藻HD01、突变株C02和突变株C06中acc基因mRNA表达水平均随着培养时间延长而先上升后下降,在第8天达到最大值。其中,突变株C02和突变株C06中acc基因mRNA表达量仅仅达到小球藻HD01中acc基因表达量的11.57%和22.14%。本研究利用化学和物理的方法对小球藻进行诱变育种,发现紫外诱变对藻株脂质含量影响较大,复合诱变对藻株比生长速率影响较大,分析筛选得到的突变藻株中脂质合成和光合作用关键酶活性变化,发现突变株中酶活性均随培养时间延长而下降,acc基因表达量对且藻株中最终脂质积累量无明显影响,说明藻株中最终脂质积累量是多种关键酶共同作用的结果。
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