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背景与目的：不同感染方式引起的慢性丙肝(chronic hepatitis C, CHC)的疾病进展可能有所不同。作为独特的感染方式,单采血浆引起的CHC患者的疾病进展少有报道,目前更是几乎没有利用肝活检获取的组织病理学结果来证实丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)感染约20年后肝纤维化进展的研究。在肝脏的疾病进展中,鞘脂可能会参与肝细胞的凋亡与肝内炎症的发生,同时能够影响肝内脂肪变性的进展,并可能参与到肝脏疾病的自然进程中。目前还很少有研究报道鞘脂在慢性HCV感染的疾病进展中的作用。因此本研究的主要目的是,基于肝活检和鞘脂组学的方法,阐明单采血浆引起的HCV感染约20年后CHC患者肝纤维化的进展及明确影响其疾病进展的因素；揭示CHC患者血浆鞘脂水平变化及寻找与CHC疾病进展中的肝组织炎症,肝纤维化和肝脂肪变性有密切关系的血浆鞘脂指标；进一步在血浆鞘脂中寻找鉴别不同疾病状态的潜在生物标记物；初步明确鞘脂代谢参与肝细胞凋亡发生的可能病理机制。方法：本研究招募的研究对象为未经抗病毒治疗的122例汉族CHC患者队列。患者全部是在1992年至1995年之间,由于单采血浆后多次血细胞回输导致HCV感染。对患者进行超声引导下肝脏活组织检查,利用Metavir评分系统来评估肝纤维化分期,使用Scheuer评分系统评估肝内炎症分级,根据肝细胞脂肪变性比例进行肝内脂肪变分级。收集患者临床常规指标数据。基于高效液相色谱-质谱／质谱的鞘脂组学检测平台,检测肝穿患者血浆鞘脂水平,并探讨其与肝组织炎症、纤维化、脂肪变性程度的关系。基础研究中采用体外siRNA技术阻断糖化神经酰胺合成酶表达,利用四唑盐比色法、AnnexinV-FITC/PI免疫荧光方法、酶联免疫吸附实验方法、实时荧光定量PCR方法、Western blot方法检测糖鞘脂代谢异常后肝细胞的增殖和凋亡情况。结果：共有120例患者进行肝组织活检,其余患者中一例由于肝硬化腹水未进行肝活检。肝硬化的患病率为2.5%。肝脏炎症是中重度肝纤维化(F≥2)的独立影响因素(比值比[odds ratio, OR] = 5.02;95%置信区间[confidenceinterval, CI]:2.17-11.63)。通过高效液相色谱-质谱/质谱分析,共鉴定和定量了44种血浆鞘脂。在肝内炎症方面,在全部CHC患者和丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)正常的CHC患者中,糖化神经酰胺(hexosylceramide, HexCer) (d18:1/22.0)为肝内坏死性炎症(G≥2)的独立影响因素,其校正后的OR值分别为1.01(95%CI：1.0-1.02)和1.02(95%CI：1.01-1.03)。并且在区分ALT正常的CHC患者肝内坏死性炎症方面,在鞘脂和常规指标中,HexCer(dl 8:1/22:0)具有最大的曲线下面积(area under the curve, AUC)。在肝纤维化方面,在全部CHC人群和已经发生显著肝纤维化(F≥2)的CHC人群中,HexCer (d18:1/12:0)与严重肝纤维化(F≥3)有密切关系,同时具备一定区分严重肝纤维化的能力,尤其联合常规指标后鉴别严重肝纤维化的能力有上升趋势。在肝内脂肪变性方面,血浆鞘磷脂(sphingomyelin, SM) (d18:1/22:0)水平为肝内脂肪变性独立、显著的影响因素,其校正后的OR值为1.12(95%CI：1.01-1.24)。在HCV基因2型的患者中,SM (d18:1/22:0)与肝内脂肪变性的存在同样独立相关(OR = 1.21; 95%CI:1.04-1.40),其鉴别基因2型CHC肝脂肪变性的AUC为0.726(95%CI：0.581-0.872)。体外基础实验表明,干扰糖化神经酰胺合成酶基因表达后,肝细胞的增殖明显被抑制,出现明显凋亡现象。同时Bcl-2 mRNA表达量下降,Bax mRNA表达量升高,Caspase 3的mRNA和蛋白水平表达均上调。结论：根据肝活检结果,因单采血浆而感染HCV的患者在感染大约20年后肝硬化的患病率较低,肝内炎症与中重度肝纤维化的发生密切相关,控制肝组织炎症可能会延缓肝纤维化进展。在CHC自然进展中,血浆鞘脂HexCer(d18:1/22:0)与肝内坏死性炎症关系密切,具有诊断肝内坏死性炎症的较好潜力,尤其对于ALT正常的CHC患者。血浆HexCer(d18:1/12:0)与CHC患者特别是具有显著肝纤维化CHC患者的严重肝纤维化的发生可能有关。SM (d18:1/22:0)可能是HCV基因2型CHC患者肝内脂肪变性新的生物标记物。基础研究提示糖化神经酰胺合成酶的缺乏引起的鞘脂代谢改变可能参与肝细胞的增殖和凋亡的过程中。