中国猕猴属进化分析及物种特异性遗传标记的研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:jane_89
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对野外调查和保护执法工作中获得的猕猴属动物疑似样品进行物种鉴定时,往往是面对污染、腐败、残缺不全(如毛发、骨骼、蹄甲、脏器、肌肉纤维等)或极微量的检材,难以检查辨认。建立对我国猕猴属物种(特别是微量组织)进行分子检测的灵敏、精确、可靠的方法,解决我国猕猴属5个物种的分子生物学鉴定技术问题是十分有意义的。 试验一:参照人类和猕猴cytb基因两端序列设计合成引物对Ca、Cs,对猕猴属2个物种熊猴和豚尾猴的cytb基因进行扩增,并将扩增片断测序,测得cytb基因全长1140bp的片断序列(其中豚尾猴的基因登陆号是:EU204975)。利用DNAstar软件进行比对,构建猕猴属系统进化树,进行遗传进化分析,并为其物种的分子鉴定奠定基础。 试验二:从Genbank下载的7种常见的物种、猕猴属5个物种及同科相近属、同目相近科10个物种的cytb基因序列,利用DNAstar软件进行种间序列比对,寻找猕猴属5个物种的保守突变位点,然后再根据引物设计有关原则,设计合成对该属物种的一对特异性引物:Ma、Ms。用该对引物对从10种近源物种和7种常见物种的肌肉、毛发或粪便中提取的总DNA或mtDNA的细胞色素b段进行PcR扩增,并对其特异性、敏感性和重复性进行了验证。结果表明,引物Ma、Ms对我国猕猴属物种DNA特异,即在PCR反应时,该引物只能特异地扩增猕猴属物种DNA,而对一些常见物种及近源物种的DNA不能扩增,经验证检测正确率100%,表明了本方法稳定、灵敏、可靠。从而达到对猕猴属微量组织鉴定的目的,建立了猕猴属5个物种的分子生物学查验和实验室确证方法。为野外调查中获得的猕猴属动物的残余物及其部分微量样品的查验提供了便捷、可靠的检测手段。 比对猕猴属5个物种cytb基因序列,寻找各物种的保守突变点,并根据这些突变,利用Primer 5.0和Oligo 6.0软件设计各物种的特异引物,然后对其特异性、敏感性和重复性进行了验证,并对PCR条件进行了优化。验证结果表明:各猕猴属物种的特异引物对相应物种的DNA能特异PCR扩增,即在PCR反应时,引物只能分别特异地扩增相应物种的DNA目的片断,而对猕猴属其他物种的DNA不能扩增,经验证检测正确率100%,表明本方法稳定、灵敏、可靠。从而达到对猕猴属5个物种微量组织鉴定的目的,建立了猕猴属5个物种分子生物学查验和实验室检验的方法。为野外调查中获得的猕猴属动物的残余物及其部分微量样品的查验提供了方便、可靠的检测手段。
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