第一章：匹罗卡品致痫小鼠自发性癫痫发作模型的建立及癫痫后海马新生神经细胞增生的研究目的：探讨匹罗卡品致痫小鼠自发性癫痫发作模型的特点,观察癫痫发作后海马结构齿状回颗粒细胞下层中新生神经细胞增生的变化。方法：1.6-8周成年雄性C57BL/6小鼠进行随机分配为实验组和对照组,建立匹罗卡品致痫后自发性癫痫发作小鼠模型。对实验组小鼠进行连续50天的行为学监测,观察其自发性痫性发作的频率、时程和发作规律(n=8)；并在50天后行海马结构尼氏染色观察其病理学改变。2.将造模成功的小鼠在癫痫持续状态(SE)后1周,2周,4周,8周,12周和正常对照组(各组n=3)的脑组织进行Doublecortin (DCX)的免疫组化染色观察新生神经细胞的分布；同时应用western blot方法检测各组小鼠海马组织中DCX的表达变化(各组n=3)。结果：1.对模型小鼠连续50天的行为学监测显示：匹罗卡品诱发癫痫持续状态后87.5%的模型小鼠存在自发性癫痫发作。模型小鼠在3-14天不等的潜伏期后开始出现自发性痫性发作；其发作时程约10-40秒,平均每周出现2.18±0.45次,并多在昼夜交替时出现。其次,模型小鼠的自发性痫性发作具有簇发性。2.匹罗卡品致痫后有自发性癫痫发作的小鼠模型海马结构尼氏染色显示门区神经元显著减少的现象恒定出现,同时可见CA1、CA3区锥体细胞排列紊乱,CA1区神经元丢失；此外一部分的模型小鼠表现为齿状回颗粒细胞减少、排列紊乱,或颗粒细胞层弥散化。3.自发性癫痫发作小鼠模型中各时间点DCX的免疫组化和Western Blot检测发现DCX+细胞和DCX蛋白的表达在模型小鼠中的显著增多。这种现象在SE后1周即可见到,在SE后4周最为明显；在SE后8周开始下降,但仍与正常对照组无明显差异；至SE后12周,DCX+细胞显著减少,其蛋白表达亦下降。在最初时增生的DCX+细胞呈簇状分布,随时间推移出现迁移分散；DCX+细胞逐渐增多的同时伴有DCX+细胞树突的分支增加。结论：匹罗卡品致痫后自发性癫痫发作小鼠模型具备与颞叶癫痫相似的行为学特点和病理学改变,并且存在有持续的新生神经元增生。第二章：匹罗卡品致痫小鼠自发性癫痫发作相关的ERK通路激活及其对新生神经细胞影响的研究目的：研究匹罗卡品致痫小鼠自发性癫痫发作模型海马结构中ERK通路激活的改变,并探索性研究自发性癫痫发作后ERK通路的活化影响新生神经细胞增生的可能机制。方法：1.将SE后2-7周具有自发性痫性发作的小鼠进行行为学观察,在正常对照组(n=14),自发性癫痫发作后2min (n=5),3min (n=3),6min (n=2),30min (n=3)(在此之前12 h无其它痫性发作)和发作静止期(n=3)进行脑组织ERK通路活化(pERK)的检测,并比较了自发性癫痫发作后pERK与Fos, GABAAR 6亚基的表达差异。2.对自发性癫痫发作后2min的模型小鼠海马结构进行pERK与BLBP,GFAP, S100β,Nestin, Pax6, NeuroD, PSA-NCAM, DCX, Tuj-1, Prox1,NeuN, Ki67, Mcm2的免疫荧光,检测表达pERK的细胞类型(各组n=5)。3.半定量分析正常组和自发性癫痫发作后颗粒细胞下层细胞增殖指标Mcm2标记的细胞密度的变化,并通过检测BLBP与Mcm2的共表达(n=5)观察自发性癫痫发作后海马结构中多能神经干细胞的增殖潜能改变。4.利用pERK/BLBP/Mcm2免疫荧光三标技术检测自发性癫痫发作后颗粒细胞下层ERK通路活化与多能神经干细胞增殖的关系(n=3)。结果：1.在正常对照组中,少数pERK阳性的细胞散在于颗粒细胞层中,在发作静止期,其表达显著下降。而在自发性癫痫发作后ERK通路被迅速激活：在自发性癫痫发作后2min,pERK在颗粒细胞下层中的表达显著增加,随后扩散到整个颗粒细胞下层；在自发性癫痫发作后6min达高峰,30 min后回到基础水平。在与Fos, GABAARδ亚基的表达比较发现Fos表达较pERK表达延迟,并且出现Fos和pERK表达上调的区域表现为GABAARδ亚基表达的下调。2.在模型小鼠自发性癫痫发作后2min,颗粒细胞下层中有77.62±4.89%的pERK+细胞表达多能神经干细胞标记物BLBP,77.68±5.50%的pERK+细胞表达GFAP,21.67±7.12%的pERK+细胞表达具有神经元潜能的神经干细胞指标NeuroD,少于5%的pERK+细胞表达PSA-NCAM。pERK+细胞不表达胶质细胞标记物S100p,亦不表达神经元前体细胞标记物DCX, Tuj-1, Prox1,NeuN。3.在模型小鼠自发性癫痫发作后2min,Mcm2标记的细胞密度显著高于正常对照组；同时其BLBP+Mcm2+细胞在BLBP+细胞中的比率显著增加。4.在模型小鼠自发性癫痫发作后2min,所有BLBP+Mcm2+细胞亦同时表达pERK。结论：1.pERK作为ERK通路活化的指标,在匹罗卡品致痫后自发性癫痫发作小鼠模型中随着其癫痫活动状态的不同呈现相应的改变,是衡量其神经元活动敏感的指标之一。2.在匹罗卡品致痫后自发性癫痫发作小鼠模型中,其多能神经干细胞的增殖潜能显著增加。3.在匹罗卡品致痫小鼠模型自发性癫痫发作后,ERK通路首先在多能神经干细胞和早期具有神经元潜能的干细胞中激活,并可能促进其增殖潜能。4.自发性癫痫发作可能通过影响新生神经元形成过程中相关环节从而促进癫痫后新生神经元的增生。