发酵液中核黄素分离纯化工艺的研究

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本论文研究的主要内容是:通过对核黄素性质分析研究,提出一种直接离心提取发酵液中核黄素的方法。该方法分两个主要操作单元:核黄素粗提和粗结晶精制。粗提单元:首先对核黄素发酵液进行热处理,冷却至常温后用HCl调节发酵液至酸性。采用离心法使菌体和核黄素结晶沉淀下来,用NaOH溶液充分溶解核黄素沉淀,然后离心使核黄素与菌体分离,最后通过氧化加热含有大量核黄素的上清液,得到核黄素粗结晶。精制单元:用HCl酸化核黄素粗结晶一定时间,然后热处理除去粗结晶中部分蛋白等不溶物,离心得高纯度核黄素结晶。在粗提单元中研究了不同提取工艺的条件优化:通过对不同热处理温度研究得出在60℃下,加热30min能极大提高核黄素的纯度和收率;核黄素的溶解度受pH值影响较大,在碱性条件下溶解度较大,在酸性条件下较小。研究表明核黄素在发酵液pH=3时,能使发酵液中核黄素充分析出;通过不同离心条件研究表明离心转速在9000r/min,离心时间10min时能达到很好的离心效果;对不同浓度NaOH溶解核黄素研究得出:当NaOH的浓度为0.4mol/L时,不仅能充分溶解发酵液中核黄素,而且还能保证核黄素不发生可逆变性;研究表明双氧水的浓度控制在0.3%(w/v),同时配合空气进行氧化能很好的提高收率;氧化温度为80℃,氧化时间为2h能很好提高核黄素的粗收率和粗纯度。精制单元通过不同条件的优化得出:以1g核黄素粗结晶加入15ml0.2mol/L的HCl溶液,酸化4小时,然后在75℃下加热30min能极大提高核黄素的终纯度。核黄素的最终收率在85%以上,纯度达到99%左右。
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