金匮肾气丸载于张仲景《金匮要略》中,主要由附子、桂枝、熟地黄、山茱萸、山药、牡丹皮、泽泻、茯苓八味药材组成,具有温补肾阳、阴阳双补的作用。现代药理表明,该方具有改善糖、脂代谢、增强神经-体液调节、提高免疫力、延缓衰老的功效。兽医临床证实,在金匮肾气丸基础上添加黄芪、五味子、麦门冬等补气益气养阴药组成的加味金匮肾气丸(MJS),对老年动物肾气虚兼阳虚的内分泌功能紊乱的相关疾病,效果更为突出。为了阐明该金匮加减方的作用,运用D-半乳糖联合氢化可的松构建衰老兼肾阳虚小鼠模型,灌服不同剂量的MJS,检验其在老年肾阳虚动物内分泌及细胞因子方面的功效,为老年动物临床用药提供理论依据。衰老兼肾阳虚小鼠模型的构建试验,将24只30±2 g昆明雄性小鼠随机分为4组,空白对照组、模型Ⅰ组、模型Ⅱ组、模型Ⅲ组,1~40 d模型Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组小鼠分别于颈背部皮下注射100 mg/kg·d、200 mg/kg·d、300 mg/kg·d D-半乳糖溶液,41~50d三个模型组均给予25 mg/kg·d后肢注射氢化可的松注射液,51~68 d正常饲喂,构建衰老兼肾阳虚模型,空白对照组给予等量生理盐水。试验过程中阶段性检测小鼠肛温变化,试验结束后收集血清,放射性免疫分析法检测血清中T3、T4、TSH、ACTH、COR水平,HE染色观察肝脏、肾脏病理变化,ELISA法检测血清中IL-2、IFN-γ、TNF-α的含量。结果表明,与空白组比较,三个模型组体重增长缓慢,体重增长率显著降低、肛温降低;显微镜观察模型组均可见肝脏组织细胞肿胀、变性坏死,肾脏组织肾小球萎缩,肾小囊壁层细胞肿胀,肾小管上皮细胞坏死等不同程度的组织损伤。与对照组比较,模型各组细胞因子IL-2、IFN-γ剂量依赖性降低,TNF-α剂量依赖性升高,均有极显著差异(P<0.01);另外,模型Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组的T3水平均极显著降低,TSH极显著升高;模型Ⅱ组和Ⅲ组的T4、ACTH含量相比对照组下降,具有显著性差异(P<0.01)。结果表明,三个剂量组均一定程度影响小鼠的精神状态以及内分泌和免疫指标,综合所有指标,200 mg/kg·d的D-半乳糖溶液结合25 mg/kg·d氢化可的松,能诱导出衰老兼肾阳虚的临床变化,对其内分泌和免疫指标也有显著影响,因此选择这个剂量进行金匮加减方的试验。为了探索金匮加减方MJS的作用机理,将60只小鼠随机分为5组,空白对照组(A),衰老兼肾阳虚模型组(B)、三个不同剂量金匮加减方组(C组0.80 g/kg、D组1.60 g/kg、E组3.20 g/kg)。模型组(B)及三个组的小鼠均按照模型构建的方法进行处理,1~40 d在颈背部皮下注射200 mg/kg·d D-半乳糖溶液,41~50 d后肢注射25 mg/kg·d氢化可的松,51~68 d正常饲喂。金匮加减方C、D、E组的小鼠在造模同时,于1~68 d每天灌服不同剂量的金匮加减方MJS,A、B组灌服等量的生理盐水。结果显示,与模型组比较,中药组小鼠的精神状态显著好转,肝组织细胞肿胀、细胞变性坏死现象明显减轻,肾小囊壁层细胞肿胀、肾小管上皮细胞变性程度显著改善。三个剂量组的肝脏、肾脏组织中SOD活性明显提高,肝脏组织内MDA含量显著降低,其中1.60 g/kg的中剂量组结果最为突出;其次,三个金匮加减方组肾组织中NO水平均显著下降,血清中BUN、CRE含量显著降低(P<0.01),并有剂量依赖性;另外,0.80、1.60、3.20 g/kg三个不同剂量的金匮加减方均能显著性提高T3、T4、ACTH含量,降低TSH水平(P<0.01),以中剂量MJS的结果最佳;其细胞因子的检测结果表明,中药组剂量依赖性提高血清中细胞因子IL-2、IFN-γ水平,降低TNF-α的含量(P<0.01);免疫组化法结果显示,不同剂量的MJS能够明显抑制促凋亡因子Bax在肝肾组织中的表达,促进抑凋亡因子Bcl-2在组织中的含量;Western blot测定肾脏组织中Klotho含量表明,低、中剂量的MJS能够显著提高其在肾脏组织中的含量。结论:通过临床表现、激素、免疫因子水平测试,组织病理及凋亡蛋白检测,200 mg/kg·d D-半乳糖联合25 mg/kg·d氢化可的松可以构建稳定的衰老兼肾阳虚小鼠模型;金匮加减方MJS可调解内分泌系统的功能,降低组织氧化损伤,提高抗凋亡能力,增强免疫力,维持机体平衡,通过补肾助阳,滋阴补气在一定程度上缓解衰老兼肾阳虚小鼠的内分泌紊乱和免疫力下降,提高衰老肾阳虚动物生存质量。三个剂量组中,以1.60 g/kg剂量的金匮加减方效果最佳。