背景和目的：基因治疗(Gene thrapy)：是向靶细胞引入正常有功能的基因，以纠正或补偿所产生的缺陷，从而达到治疗疾病的目的。生物医学的深入研究表明，人类的各种疾病都直接或间接的跟基因有关，基因治疗中最关键的步骤就是如何将外源基因准确安全的导入宿主细胞染色体相应的位置以达到纠正缺陷基因的目的，腺相关病毒(adeno-associated virus，AAV)载体是目前常用的载体之一因具有诸多优点而作为基因治疗中应用广泛的运载工具，在有REP68/78蛋白的协助作用下能够稳定的整合到人19号的染色体(19q13.4)区域[1]，即AAVS1所在的区域。这是当前发现的唯一的可以定点整合到哺乳动物基因组DNA的区域。当前的AAV的整合方法，通常都是插入到AAVS1区域，但是这个区域通常也包含了很多功能基因，外源基因的随机整合可能导致插入突变，干扰正常的基因表达以及宿主细胞重要的信号通路，引发肿瘤及一些其他的疾病， Rep基因是辅助AAVS1区域整合不可缺少的成分，Rep基因转入至细胞后可能发生AAVS1区域以外的整合，造成突变，常用的转染Rep基因质粒的方法可能导致该基因的持续和过高表达，导致细胞毒性和引发肿瘤的危险，所以在AAVS1区域寻找一个准确的整合位点和如何调控Rep的表达显得非常的重要。同源重组的方法是目前定点整合最精确和最常用的方法，但是重组率很低，本文通过构建构建带有同源臂载体pTAVEN同RepmRNA共转染入Hela细胞中瞬时调控REP蛋白的表达从而介导了AAVS1区域定点同源重组，这将有益于提高基因治疗的安全性和有效性。方法：构建定点整合打靶载体pTAVEN，该载体包含了EGFP和neo表达基因，以及AAVS1-a和AAVS1-b两个同源臂，体外转录获得Rep mRNA共转染入Hela细胞中同只单转pTAVEN的细胞进行比较，Western blot方法检测REP蛋白表达的时间及表达量，转染后细胞通过荧光细胞流式术进行分选GFP+细胞，G418筛选阳性细胞克隆，PCR检测细胞克隆的基因组DNA是否发生了同源重组，再用Southern blot对实验组和对照组进行同源重组后片段的检测，比较两者同源重组的几率的差异。结果：Rep mRNA入Hela细胞中，REP蛋白仅瞬时表达，降低了细胞毒性。RepmRNA的转染可以更好的促进宿主细胞的定点整合，在pTAVEN和Rep mRNA共同转染入Hela细胞细胞中，在29.4%的细胞克隆中，外源基因整合到AAVS1的特定位点。远高于对照组，说明REP蛋白能够调控位于ch19q13.4-ter的AAVS1区域的同源重组，这对于基因治疗的安全性和有效性具有重要意义。