本课题在前期研究的基础上，对具有确切抗血小板聚集活性的天麻提取部位G2<[1]>进一步用硅胶柱色谱分离划段，进行活性追踪；同时对天麻各提取部位进行抗乙酰胆碱酯酶活性的研究。 目的：通过抗血小板聚集实验、血小板细胞钙离子测定实验和乙酰胆碱酯酶实验，探讨天麻治疗老年痴呆的有效部位及作用机制。 方法：抗血小板聚集实验 采用Born氏比浊法，用二磷酸腺苷(ADP)和花生四烯酸(AA)诱导的家兔体外血小板聚集实验对分离段G<,2A>、G<,2B>、G<,2C>和G<,2D>进行活性筛选；用ADP、AA和PAF(血小板活化因子)诱导的兔体外血小板聚集实验对分离组分G<,2B1>、G<,2B2>、G<,2B3>、G<,2B4>和G<,2B5>进行活性筛选：对不同浓度的分离组分G<,2B2>进行抗ADP诱导的兔体外血小板聚集实验，观察其作用强度和半数抑制浓度IC<,50>值；兔耳缘静脉注射G<,2B2>进行抗．ADP和AA诱导的血小板聚集实验，观察其体内显效时间、达峰时间、作用维持时间及最大抑制率；用ADP、AA和PAF诱导的兔体外血小板聚集实验，观察1.0mg·mL<-1>、0.1mg·mL<-1>和0.01mg·mL<-1>的天麻素对血小板聚集功能的影响。 血小板细胞钙离子测定 采用双波长荧光光度法对分离组分G<,2B2>进行抗血小板聚集作用机制即细胞内钙水平测定，观察其对ADP诱导的血小板细胞内总钙、内钙释放和外钙内流的影响：乙酰胆碱酯酶测定 采用改进Ellman法观察天麻提取部位G1、G2、G3、G4和天麻素对乙酰胆碱酯酶活力的影响。 结果： 1．采用Bom氏比浊法，用ADP和AA诱导的家兔体外血小板聚集实验对分离段G<,2A>、G<,2B>、G<,2C>和G<,2D>进行活性筛选：G<,2B>在终浓度2.2mg·mL<-1>和1.1mg·mL,-1>时，对ADP和AA诱导的血小板聚集均有明显的抑制作用，高浓度(2.2 mg·mL<-1>)所表现出的对聚集率的影响与低浓度(1.1mg·mL<-1>)相比，差异有非常显著性意义(p<0.01)。 2．用ADP、AA和PAF诱导的兔体外血小板聚集实验对分离组分G<,2B1>、G<,2B2>、G<,2B3>、G<,2B4>和G<,2B5>进行活性筛选：G<,2B2>作用较为明显，在终浓度0.073mg·mL<-1>时，对ADP诱导的血小板聚集的影响最为显著，聚集率与对照组相比，差异有非常显著性意义(p<0.01)：对AA诱导的血小板聚集亦有影响，为16.31±3.89；对PAF诱导的血小板聚集无抑制作用。G<,2B1>在终浓度0.076mg·mL<-1>时，对ADP、AA、PAF诱导的血小板聚集均有抑制作用，但抑制率不高，分别为25.39±5.29、23.18±3.87和20.88±5.57。 3．对不同浓度的分离组分G<,2B2>进行抗ADP诱导的兔体外血小板聚集实验：G<,2B2>抗ADP诱导的兔体外血小板聚集作用明显，且具有浓度依赖性，IC<,50>为61ug.mL<-1>，当浓度在18ug.mL<-1>时，与对照组比较差异有显著性意义(p<0.05)。 4．兔耳缘静脉注射G282进行抗ADP和AA诱导的兔血小板聚集实验：G<,2B2>抗ADP诱导的血小板聚集作用最强，10min显效，30min达峰，注射0.066g/Kg，作用维持120min；静脉注射0.132g/Kg，作用维持180min，最大抑制率为87.44％。对AA诱导的兔血小板聚集的抑制作用相对较弱，10min显效，30min达峰，注射0.066g/Kg，作用维持60min；注射0.132 g/Kg，作用维持90min，最大抑制率为54.36％。 5．血小板细胞钙离子测定实验：G<,2B2>能阻止ADP诱导的细胞内钙的释放和外钙的内流，在36ug.mL<-1>。时，对ADP诱导的血小板细胞外钙内流和内钙释放与对照组相比差异均有非常显著性意义(p<0.01)。在18ug·mL<-1>时，仅对外钙内流有阻滞作用，对内钙释放无影响。 6．乙酰胆碱酯酶实验：G2在浓度为10.5 mg．mL<-1>时的酶活力值与PBS组相比，差异具有非常显著性意义(p<0.01)；G2在1.0mg·mL<-1>时，与PBS组比较差异具有显著性意义(p<0.05)；G3在1.7mg·mL<-1>时，对酶活力的影响与PBS组比较差异也具有显著性意义(p<0.05)；但中、低浓度的G4对乙酰胆碱酯酶活力影响，与PBS组比较差异均无显著性意义(p>0.05)。 7．ADP、AA和PAF诱导的兔体外血小板聚集实验，结果表明天麻素在1.Omg·mL<-1>、O.1mg·mL<-1>和O.0lmg·mL<-1>下对血小板聚集均无抑制作用：乙酰胆碱酯酶实验结果表明：天麻素浓度仅在1.0mg·mL<-1>时，对乙酰胆碱酯酶活力有影响，与PBS组比较，差异有显著性意义(p<0.05)。 结论： 1．G<,2B2>体外、体内均有明显的抗血小板聚集作用，其体外对ADP诱导的血小板聚集功能的抑制作用具有浓度依赖性，IC<,50>为6lμg·mL<-1>；体内抗血小板聚集作用显效快，维持时间随着剂量加大而延长。 2．G<,282>抗ADP诱导的血小板聚集作用机制之一是阻止血小板细胞内钙的释放和外钙的内流。 3．高、中、低浓度的G1、G2、G3和高浓度的G4对乙酰胆碱酯酶活力具有不同程度的抑制作用，G1、G2、G3对乙酰胆碱酯酶活力抑制作用明显；中、低浓度的G4抑制作用不明显。 4．所用剂量的天麻素对ADP、AA和PAF诱导的血小板聚集无抑制作用；对乙酰胆碱酯酶活力有一定的抑制作用。