外源性谷氨酸对角质形成细胞分泌TNF-α、IL-1β的影响

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背景:白癜风是一类以色素脱失为主要临床特征的发病率高、严重影响患者身心健康的顽固性皮肤病。目前多数学者认为白癜风是由多基因遗传背景下的自身免疫及氧化应激相互作用所致。外周血及皮损中细胞因子表达水平的变化及相互作用促进了免疫反应及炎症反应的进展,进而诱导或加重白癜风的发生、发展。既往研究发现高浓度的肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)可发动对黑素细胞(Melanocyte,MC)的免疫攻击,黑素生成减少,进而导致色素脱失。谷氨酸是中枢神经系统内一种重要的兴奋性神经递质,近年来在非神经外周组织中也发现了功能性的谷氨酸信号通路。本团队前期研究发现皮肤中存在功能性的谷氨酸信号通路。既往研究发现白癜风皮损中TNF-α、IL-1β的含量增高。有报告组织中的上述细胞因子主要由KC产生。因此,研究谷氨酸对KC分泌TNF-α、IL-1β的影响,可能为深入研究白癜风的发病机制提供理论依据。目的:研究外源性谷氨酸对KC分泌TNF-α、IL-1β的影响。方法:1.实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction)检测人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)表面有胱氨酸/谷氨酸逆向转运体的表达。2.使用Glutamate Assay Kit试剂盒检测HaCaT细胞培养上清液中谷氨酸含量。3.使用酶联免疫吸附测定(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)法检测其细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β的表达。结果:1.实时荧光定量PCR显示HaCaT细胞中有胱氨酸/谷氨酸逆向转运体的表达。2.外源性谷氨酸在0.060-0.095mM时,HaCaT细胞分泌TNF-α逐渐增多,但P>0.05,没有统计学意义;谷氨酸在0.095-0.783mM时,HaCaT细胞分泌TNF-α逐渐减少,且P<0.05,存在统计学差异。3.外源性谷氨酸在0.060-0.095mM时,HaCaT细胞分泌IL-1β逐渐增多,且P<0.05,存在统计学差异;谷氨酸在0.095-0.783mM时,HaCaT细胞分泌IL-1β逐渐减少,且P<0.05,存在统计学差异。结论:1.HaCaT细胞通过胱氨酸/谷氨酸逆向转运体把谷氨酸由胞内转运至胞外。2.高浓度外源性谷氨酸抑制HaCaT细胞分泌TNF-α、IL-1β;低浓度外源性谷氨酸促进HaCaT细胞TNF-α、IL-1β。
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