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目的:前期研究发现具有中度成瘤性的人胚肾细胞(Human Embryonic Kidney 293cell,HEK293细胞)在静息状态下就存在NFATs的活化现象,且导入外源性CHP2基因可促进HEK293细胞中活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFATs)的活化及内皮素1(endothelin 1,ET1)的表达,促进肿瘤细胞的生长。我们的课题旨在分析不同癌细胞株中NFATs及ET1的表达差异,阐明与肾癌细胞786O增殖和迁移相关的NFATs亚型的种类及其组成性活化状态,并探讨NFATs组成性活化对肾癌细胞786O增殖和迁移的影响及其作用机制。方法:1.通过逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcriotion-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测不同癌细胞株中ET1及NFATs的m RNA表达水平,同时应用蛋白印迹(Western-blot)和核浆分离技术确定肾癌细胞786O和人胚肾上皮细胞HEK293中NFATs的蛋白水平的表达及核、浆分布情况;2.采用细胞计数和细胞增殖—毒性检测方法(CCK8)来比较肾癌细胞786O及HEK293细胞增殖能力的差别;3.借助划痕实验观察786O和HEK293细胞的迁移能力的差异;4.使用Ca N-NFAT通路阻断剂Cs A阻断钙调磷酸酶(Ca N)的活性,观察其对肾癌细胞786O和HEK293细胞的影响(包括ET1和NFATs m RNA和蛋白的表达水平、细胞增殖情况、细胞迁移和侵袭能力以及细胞的凋亡情况)。结果:1.NFATc1,NFATc3和ET1在不同癌细胞株中有表达,但不同癌细胞株中存在显著差异。2.NFATc1特异性表达于786O细胞中;NFATc3在786O中的表达比HEK293高约3倍,且NFATc3组成性活化程度高于HEK293;ET1特异性表达于HEK293中;3.786O细胞增殖能力明显大于HEK293,培养72h可见3倍以上差距;4.786O细胞的迁移能力比HEK293细胞强,培养12h即可见显著差异;5.用环孢素(Cs A)阻断钙调磷酸酶(Ca N)的活性,培养24h后,786O细胞中ET1 m RNA水平的表达下降4倍以上,且NFATc3的入核也有所减少;6.用环孢素(Cs A)阻断钙调磷酸酶(Ca N)的活性,786O细胞的增殖受到明显抑制,降低1倍左右,而HEK293细胞却几乎不受影响;786O的迁移速度也明显下降,培养12h即可见显著差异;用Cs A处理72h后,786O细胞的凋亡比例增加1倍,HEK293细胞却没有明显变化;同时,786O细胞的侵袭能力有显著地下降。结论:NFATc3的表达和组成性活化可能与肾癌细胞786O的增殖和迁移有关;NFATc3可能是通过促进内源性ET1的表达和抑制细胞凋亡两种途径促进肾癌细胞786O的增殖和迁移。