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前言 肺癌是我国的常见病、多发病，目前原癌基因与抑癌基因和肺癌的相关性研究已经成为国内外肺癌肿瘤分子生物学研究的热点。p73基因是Kaghad于1997年首次发现的p53家族新成员，其定位于1P36.2-1P36.3。其与p53基因在结构和功能上具有相似性，因此有人认为p73基因可能是候选的抑癌基因。但现有研究认为：其表达水平在不同类型的肿瘤中不尽相同，p73的生理功能以及在肿瘤中的作用等问题均有待进一步研究，并成为肿瘤分子生物学和遗传学领域的一个研究热点，p73基因在肿瘤发生，发展中的地位及作用目前尚存在争议。 肺癌发病率和死亡率50年来不断上升，已成为增长最快的一种恶性肿瘤，作为一个世界性难题严重地威胁着人类健康与生命。本研究应用免疫组织化学方法检测和分析原发性非小细胞肺癌中p73蛋白的表达情况，探讨其在肺癌的发生、发展及转移中的作用。 实验材料及方法 实验对象：抽取2000年3月-2000年6月年间中国医科大学附属第一医院胸外科手术切除的85例非小细胞肺癌及32例肺良性病变的正常肺组织。85例病人，最大年龄为80岁，最小为30岁，平均年龄为60.7±2.6岁；男性48例，女性37例。其中鳞癌42例，腺癌43例。所有病例术前均未行化疗和放疗，术中经系统淋巴结廓清，术后经病理证实。分期标准为国际抗癌联盟(UICC)1997年 10月出版的第五版《恶性肿瘤 TNM分类》中的肺癌分期标准，病理分级按1981年世界卫生组织（WHO）公布的标准。 1．切片制备：常规石蜡包埋，切成4微米厚连续切片，每例标本切成3张，备HE染色及p73免疫组化用，另一张作阴性对照。载玻片经APES液处理。 Zi…3染色：切片常规脱腊至水化后，经抗原修复，滴人非抗原性动物血清O0％正常羊血清）封闭，室温下孵育5分钟，PBS液冲洗一次。按S－P试剂盒步骤分别加一、h抗体，DAB，苏木素复染色，中性树胶透明封片。 3．结果判定…3蛋白均定位在细胞核，呈程度不同，基本均匀的棕色反应。阳性细胞率大于10％为阳性。统计学分析：X’检验P＜0．05为有统计学意义。 实验结果 85例非小细胞肺癌中P73蛋白阳性表达结果为56例，占65．9％，阴性结果29例，占34．l％。肺正常组织32例，阳性4例，占12．5％，阴性 28例，占 87．5％。P73蛋白在肺癌中的表达明显高于正常肺组织（P＜0．0门。4二例鳞癌中阳性为23例，占54．8％；43例腺癌中，阳性33例，占 76．7％。X‘统计分析结果表明肺腺癌中 P73蛋白的表达明显高于鳞癌中 P73蛋白的表达（P＜0．05入P73蛋白在不同组织分化的非小细胞肺癌中的表达无显著差异u＞O．05）；叨3在1＋11期阳性表达率为55．3防（2“轩）；111＾期阳性表达率为78．9％u0乃8XP73蛋白在非小细胞肺癌中随着TN M分期的增加表达增强（P＜0．05八85例非小细胞肺癌中有54例伴有肺门及纵隔淋巴结转移（N＿＊，五例无淋巴结转移（NO入统计分析结果：P73在有淋巴结转移的 NSCLC（NI4）中阳性表达率为 74．1％（40乃4人在无淋巴结转移的 NSCLC（N）中 ·2·阳性表达率为引．6％（1601入具有显著差异瞩＜队05人 P73蛋白在男性肺癌患者的阳性表达率为 70．8％门4／48人女性中为59．4％K2乃7人表达无差异（P＞O．05厂小于6O岁的阳性表达为 64．9％汪407人大于等于 60岁的阳性表达率为 66．7％门2／4幻；二者表达也无显著差异河＞0．05人 讨 论 p73基因是 Kaghad等于 1997年发现，其与 P53基因具有相当的同源性。后来根据此序列编码的多肽分子量将其命名为 P73基因。p73基因定位于 lp36．2－lp36．3。p73基因在人体正常组织内有广泛的低水平表达，通过RT－PCR方法在人脑，心，肝，脾，肾等器官组织中均可检测到p73基因的转录。由于p73蛋白与 p53蛋白具有非常相似的结构和功能，有人将其作为一个候选的抑癌基因。后续的研究表明…3基因的表达水平在不同类型肿瘤细胞中不尽相同：本实验中p3在肺癌组织中表达显著强于正常肺组织，未表现出抑癌基因的作用（P＜0．m人本实验也证实了肺癌组织中的确存在p73基因的过渡表达，提示p73基因的过渡表达可能是肺癌发生过程中的分子事件，参与了调控肺癌的发展过程。据此我们分析认为：①P73基因与经典的抑癌基因不同，具有肿瘤特异性，即在肿瘤组织中的表达和基因特征具有个体特异性和组织特异性，在某些肿瘤发生及发展中起抑癌基因作用，而在另一些肿瘤中…3基因的高表达导致肿瘤的发生。本实验证实了肺癌组织中的确存在p73基因的过渡表达，提示这可能是肺癌发生过程中的分子事件，参与了对肺癌发生、发展过程的调控。②p73在肺癌组织中的表达特异性也可能是机体对恶性肿瘤的防御和应激反应。机体力图通过上调P73蛋白的表达来抑制肺癌的发生与发展。 ·3· 本实验也得出p73蛋白的表达与性别，年龄，无关，而与病理类型?