胸腺移植合并CD4--DLI对异基因造血干细胞移植后T细胞重建的影响

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目的:  研究胸腺移植合并CD4--DLI对异基因造血干细胞移植后T细胞重建的影响。  方法:  1.在移植的前一天,将受体小鼠(BALB/c小鼠)做致死剂量放疗预处理,然后分为三组,allo-HSCT(HSCT组),allo-HSCT+TT(TT组),allo-HSCT+TT+CD4--DLI(CD4--DLI组),三组均做异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)处理,TT组移植一个供体(C57BL/6)新生小鼠的胸腺,CD4--DLI组另外给予去除了CD4+T细胞的淋巴细胞输注(CD4--DLI),移植后不同时间点对小鼠进行检测。  2.利用细胞计数仪检测脾脏的细胞总数,利用流式细胞仪检测脾脏中供体CD4+与CD8+T细胞的百分比,计算出脾脏中供体CD4+与CD8+T细胞的总数和CD4+∕CD8+T细胞的比值,评价在外周扩增的T细胞的动态重建情况;  3.对受体胸腺与移植胸腺,利用细胞计数仪分别检测细胞总数,利用流式细胞仪检测CD4+∕CD8+T细胞的百分比、供体受体的百分比,了解T细胞重建场所的微环境的状态;  4.利用流式细胞仪检测脾脏内CD44-CD62L+初始CD4+和CD8+T细胞百分比,计算出初始CD4+和CD8+T细胞的总数;  5.采用Real time-PCR定量检测T细胞重排删除环,评价经胸腺再生的T细胞的动态重建情况;  6.用刺激素刺激脾脏细胞后,利用流式细胞仪检测CD4+和CD8+ T细胞内的细胞因子IFN-γ、IL-2,评价T细胞功能的重建情况  7.利用流式细胞仪,检测脾脏供体CD4+ T细胞TCR Vβ亚家族的表达,评价T细胞TCR的多样性。  结果:  1.移植后5天和2周,TT和CD4--DLI分别在移植后的早期增加CD4+和CD8+T细胞的数目  2.移植后5天和2周, TT组和CD4--DLI组中供体来源的CD4+T细胞的百分比显著高于HSCT组;CD4--DLI组中供体来源的CD8+T细胞的百分比显著高于HSCT组和TT组。移植后4周,HSCT组,TT组和CD4--DLI组之间的外周血白细胞和脾细胞数目仍没有统计学意义。  3.在移植后2周,TT组和CD4--DLI组中表达IL-2和IFN-γ的CD4+和CD8+T细胞的百分比显著高于HSCT组。另外,CD4--DLI组的CD8+ T细胞中产生IFN-γ的细胞的百分比显着高于TT组。  4. TT组和CD4--DLI组中移植的胸腺显示正常的大小和组织学结构。  5.CD4--DLI组sjTRECs的含量明显高于HSCT组和TT组。  结论:  1. TT和CD4--DLI不会影响彼此对T细胞重建的作用  2. TT合并CD4--DLI能够加快T细胞数目的重建  3. TT合并CD4--DLI能够扩大初始CD4+和CD8+T细胞库  4. TT合并CD4--DLI能够加快T细胞功能的重建  5. TT合并CD4--DLI对T细胞受体(TCR)库和胸腺无副作用  6. TT合并CD4--DLI提高了sjTRECs的含量。
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