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研究背景： 目光中的紫外线(主要为UVA和UVB)是导致皮肤日晒伤、光老化及皮肤癌的重要因素，相同剂量UVB辐射对皮肤的损伤比UVA约大800～1000倍。UVB辐射可引起角质形成细胞产生炎症因子、细胞DNA损伤及突变频率增加、甚至引起皮肤癌肿。皮肤的角质形成细胞、成纤维细胞均是紫外线照射的重要靶位，由于它们所处层次不同及本身功能特性不同，故对紫外线照射反应亦不尽相同。IL-6和TNF-α均是由表皮角质形成细胞合成的主要表皮细胞因子，参与紫外线引起的皮肤炎症反应过程及免疫调节，在紫外线介导的细胞损伤中起着重要作用。UVB辐射可引起表皮细胞周期阻滞、诱导其凋亡、促进细胞增殖，p53，p21，c-fos等基因表达对上述变化至关重要。羟氯喹有目光保护、抗炎和抑制细胞免疫作用，临床已证实羟氯喹是治疗光损伤相关疾病的有效药物。传统中药川芎、黄芩及绿茶的活性成分没食子儿茶素没食子酸脂(epigallocatechingallate，EGCG)等有着广泛的生物学效应，如吸收紫外线、抗过氧化及抗肿瘤等作用。故本项目旨在研究传统中草药茶多酚、黄芩和川芎等活性成分对培养状态下的人皮肤细胞所具有的光保护性能及作用环节，籍此可为天然防晒剂的开发和实际应用提供理论依据和实验数据参考。 目的 观察中波紫外线辐射(UVB)对体外培养的原代及永生化角质形成细胞、成纤维细胞的损伤作用；观察羟氯喹和中药单体(川芎、黄芩及EGCG)所具有的光保护效应；探讨其相关作用环节和机制。 南京医科大学硕}学位沦文方法 1.细胞培养:由健康人皮肤标本中分离培养角质形成细胞和成纤维细胞，并培养永生化角质形成细胞，分另」定量接种于培养皿或96孔板中。 2.紫外线照射:以一定剂量UVB(30、60、90耐/cm，)照射培养细胞并加入工具药物进行干预处理。 3.细胞活性检测:观察细胞损伤的形态学变化;MTT法检测细胞增殖活性;细胞计数法绘制细胞生长曲线。 4.EL工SA检测:EL工SA检测各组样本上清液中工L一6和TNF一。含量。 5.细胞周期及凋亡检测:流式细胞仪检测各受试组细胞周期及凋亡率。 6.基因表达检测:RT一PCR法检测各受试组P53，p21，c一f。s基因表达。结果 1.30、60、gomJ/emZ UVB照射后24h，上述细胞均出现增殖活性下降，活性下降程度与照光剂量成正比;加入羚氯奎、川芍、黄答及EGCG处理后，细胞活性可有一定程度恢复。 2.与未照光组相比，HaCaT细胞照光后24h工L一6和TNF一a分泌量均增加，分另，」为98.6士0.87一403.53士1.01 pg/nll和11.27士0.68一31.27土0.64Pg/ml。加入工具药物干预后，在各个UVB剂量水平，EGCG均可抑制工L一6和TNF一。分泌;羚氛奎、黄答可抑制工L一6分泌(P<0.叭)，川芍仅在90耐/cIn，剂量水平减少工L一6分泌(P<0.01);黄答和川芍在60及90 mJ/Cm，齐!J量下可减少TNF一a分泌(P<0.05)，羚氯啥仅在60 mJ/cm，剂量水平减少TNF一a分泌(P<0.01)。 3.流式细胞仪检测结果表明，UVB照射可诱导HaCaT细胞产生凋亡，其凋亡率呈UVB剂量依赖方式增加，由omJ/Cm，时的0.21%增至gomJ/cnl， 南京医科人学硕{学位论文时的71.18%;加入工具药处理后，各组HaCaT细胞凋亡率均明显下降。 4.UVB照射后24h，HaCaT细胞可出现明显S期阻滞，并随UVB剂量增大，S期细胞数量迅速下降;加入工具药处理后，可抑制UVB引起的细胞周期改变。 5.UVB照射后可明显增加HaCaT细胞中p53，p21，c一fos mRNA表达水平，所试工具药可在不同程度上下调上述基因表达。结论 羚氯奎、川芍、黄答及EGCG可在不同程度上抑制中波紫外线(UVB)辐射对人皮肤细胞(原代及永生化角质形成细胞、成纤维细胞)的损伤效应，这种光保护作用在HaCaT细胞可能与工具药抑制工L一6和TNF一二分泌以及影响p53，p21，c一f。S基因表达有关。