目的:为阐明褪黑素的抗肿瘤作用机制,本研究以角蛋白23(KRT23)为切入点,运用si RNA、Western-blot、Flow Cytometry、ECIS Ztheta细胞分析等技术手段揭示它对胃癌细胞增殖的影响及其作用机制,进而通过细胞功能学实验验证褪黑素是否通过KRT23起到抑制胃癌的作用,为丰富人们对褪黑素抗胃癌机制的认识提供理论依据,为胃癌治疗提供可能的新的分子靶点。方法:1.运用Western-blot分析KRT23在人胃癌细胞和永生化正常胃上皮细胞中的表达水平。2.筛选针对KRT23的高效si RNA干扰序列,构建KRT23的sh RNA慢病毒表达载体,通过慢病毒感染的方法构建稳定的KRT23敲减胃癌SNU216细胞模型,应用Western-blot及细胞免疫荧光法检测RNAi干扰的效应。3.采用MTS法、平板克隆实验、Flow Cytometry、ECIS Ztheta细胞分析技术检测敲低KRT23对胃癌细胞增殖的影响。4.采用Western-blot方法初步探讨KRT23对胃癌细胞增殖作用的分子机制。5.褪黑素干预KRT23敲减细胞,运用MTS法、平板克隆实验、Flow Cytometry、ECIS Ztheta细胞动态分析进一步探究褪黑素通过下调KRT23发挥抗胃癌作用的可能效应。结果:1.胃癌细胞系中KRT23蛋白水平显著高于正常胃上皮细胞。2.成功构建sh KRT23的慢病毒表达载体,获得稳定的KRT23敲减胃癌细胞模型。3.MTS实验结果显示,相较于无义干扰组,KRT23 RNAi干扰组的细胞增殖活力明显下降(P<0.01);敲低KRT23明显抑制胃癌细胞的克隆形成能力,显著增加G1期细胞比例、降低S期及G2/M期细胞比例;ECIS细胞动态分析表明,KRT23敲减显著降低胃癌细胞的Z值,抑制胃癌细胞增殖。4.测定并分析了MAPK家族相关蛋白的活性变化。结果表明KRT23的敲减可引起p-ERK1/2、p-p38的表达下调,而对ERK1/2、p38总量无明显影响,提示敲低KRT23能抑制ERK1/2、p38激活的效应。5.较无义干扰组而言,在KRT23稳定敲低的胃癌细胞株中,褪黑素处理能更显著抑制胃癌细胞增殖活力、克隆形成能力,同时使胃癌细胞周期阻滞在G1期。此外,ECIS细胞动态分析证实,KRT23敲低后褪黑素对胃癌细胞增殖的影响作用更为显著。结论:1.初步证实KRT23在胃癌细胞增殖过程中发挥重要的作用,其效应可能与调节ERK1/2和p38MAPK信号通路有关。2.KRT23介导褪黑素对胃癌细胞增殖的抑制作用。