背景与目的近二三十年以来,人组蛋白去乙酰化酶(Histonedeacetylations,HDACs)在人体实体肿瘤的发生与肿瘤发展中的充当着重要的角色,对人组蛋白去乙酰化酶的研究越来越倍受肿瘤研究者们的青睐。大量的实验研究表明,HDAC9作为II类HDACs家族的重要成员在癌症的发生与发展中发挥着极其重要的作用。目前已发现HDAC9基因在急性淋巴细胞白血病、髓母细胞瘤和肺腺癌等多种人类实体肿瘤中均存在相对高的表达。这些研究发现说明人实体肿瘤与HDAC9基因的发生发展息息相关。抑制HDAC9的活性表达己经成为恶性肿瘤非常有效的分子治疗靶点。目前为止,有关HDAC9基因与骨肉瘤细胞生物学行为之间的关系以及HDAC9基因在骨肉瘤中的生物学功能国内外的研究中鲜见报道。本实验研究HDAC9在骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞株中的表达及HDAC9在骨肉瘤细胞中的功能,并且探索其可能的分子机制。方法:(1)分别采用Real-time q PCR及Western-blot实验方法分别检测HDAC9基因m RNA和HDAC9基因的蛋白在骨肉瘤患者组织学标本中,及在同一患者邻近正常骨组织的标本中相对表达情况;与此同时,收集所有骨肉瘤患者的临床病理特征,从而分析和评价HDAC9基因在骨肉瘤患者中的临床相关性及意义。(2)运用Real-time q PCR检测分析骨肉瘤细胞MG-63和U-2OS中HDAC9基因m RNA的表达水平;构建含有HDAC9基因或者空白载体的腺病毒并检验其构建效果情况,并将成功构建的病毒载体转染至骨肉瘤细胞MG-63和U-2OS中;第一步,分别采用实时定量PCR方法、MTS方法以及Transwell细胞侵袭实验分别观察转染前后骨肉瘤细胞MG-63和U-2OS中HDAC9基因m RNA的表达变化、增殖以及侵袭能力的改变情况;第二步,采用si RNA技术进行沉默骨肉瘤细胞的MG-63和U-2OS中HDAC9基因表达水平;运用MTS实验方法与Transwell方法进行检测沉默的HDAC9基因后骨肉瘤细胞U-2OS和MG-63的侵袭能力和增殖能力的变化。(3)运用Real-time q PCR实验和Western-blot实验分别检测腺病毒转染前后骨肉瘤细胞MG-63和U-2OS中p53基因m RNA和p53基因蛋白的表达情况;采取染色质免疫沉淀测定(Chip测定)方法来检验HDAC9和下游靶基因p53之间的关联性。结果:1.结果显示30例骨肉瘤组织标本中的HDAC9基因均存在着表达情况,HDAC9基因在骨肉瘤组织标本中的表达水平明显高于HDAC9基因在正常骨组织标本中的表达水平情况,同时,骨肉瘤患者是否发生远处的转移与HDAC9基因的表达具有一定程度的相关性,而HDAC9基因的表达与骨肉瘤患者的年龄、性别、肿瘤部位、大小等一般生物学特征关系意义不大。2.在增强骨肉瘤细胞中HDAC9基因的表达后,能明显提高骨肉瘤细胞U-2OS和MG-63的增殖能力及侵袭能力;相反,运用si RNA沉默HDAC9基因表达后,反而会降低骨肉瘤细胞增殖能力与侵袭能力;3.HDAC9直接负性调控抑癌基因p53的表达。HDAC9基因抑制下游p53基因的转录是通过调控组蛋白乙酰化状态来完成的。结论:1.在骨肉瘤组织标本和骨肉瘤细胞株中,HDAC9基因呈现高表达状态,HDAC9基因的高表达情况和骨肉瘤患者远处转移,特别是肺部转移的密切相关;而HDAC9基因的表达与骨肉瘤患者的年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小等生物学特征无明显相关性;据此表明HDAC9基因高表达可以促进骨肉瘤肺部转移,HDAC9基因可作为判断骨肉瘤患者预后的一个重要检测指标。2.通过抑制骨肉瘤细胞中HDAC9基因的表达,能明显抑制骨肉瘤细胞MG-63和U-2OS增殖能力与侵袭能力,说明HDAC9基因与骨肉瘤细胞生物学行为存在分子级联调控的关系,HDAC9基因有可能成为骨肉瘤分子基因治疗的靶点之一。3.HDAC9基因的表达水平与p53基因m RNA和蛋白的表达水平在骨肉瘤细胞中表现出明显负性相关性。说明,骨肉瘤细胞中显著上调的HDAC9基因可能是负性调控其下游靶基因p53基因的表达水平参与骨肉瘤的发生、发展过程。