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蛋白质磷酸化是生物体内重要的翻译后修饰过程,对真核生物细胞的增长、分化、信号传递等过程有重要的调控作用,也与生物体激素的调节、病变的产生、环境的适应等息息相关,它与生命活动过程紧密联系。作为蛋白质磷酸化中最普遍存在的过程,丝氨酸的磷酸化对诱导蛋白质结构构象的变化有重要作用,能促使酶的活化或失活,也可通过介导相互作用影响蛋白质的识别从而改变细胞的功能。了解磷酸化丝氨酸（P-Ser）对生物体的作用机制,对于病变的研究、药物的开发等具有指导意义。生物样品中游离P-Ser的研究前题是定性定量分析,然而生物体内生理环境复杂,蛋白质、氨基酸种类繁多,干扰低含量游离态P-Ser的分析检测。因此,建立生物样品中高选择性、高灵敏度的P-Ser定量分析具有重要意义和挑战性。本文利用分子印迹技术（MIT）分子识别的选择性和金属-有机杂化聚合物（MOPH）的大吸附容量特点,分别制备了P-Ser分子印迹整体柱和MOPH修饰的整体柱,应用于P-Ser的固相微萃取（SPME）,建立了生物样品中游离P-Ser的SPME-LC-MS/MS定量分析方法,并应用于生物样品中P-Ser分离检测。主要内容包括如下两个部分:（1）在优化的合成条件下,以P-Ser为模板,丙烯酰胺为功能单体,甲醇和水为溶剂,在移液枪枪头,以水相合成法制备了P-Ser印迹聚合物整体柱。探究使P-Ser在常见有机溶剂中与交联剂（乙二醇二甲基丙烯酸酯）互溶的方法,通过四丁基氢氧化铵（TBAOH）的加入增加P-Ser在有机溶剂中的溶解性。考察了甲醇和水的用量对聚合效果的影响,用红外光谱、扫描电镜、热重分析、氮吸附解吸方法对材料的物理形貌和化学结构进行了表征,研究了材料的吸附机理,考察了该整体柱的选择性,在研究并优化了P-Ser的衍生方法的基础上,优化了萃取条件,建立了猪肝样品中P-Ser的SPME-HPLC-MS/MS分离检测方法,考察了方法的适用性并用于实际样品分析。该方法检出限（LOD,S/N=3）为2.5 ng g-1,日内日间RSD在0.48-4.4%范围内,回收率在95.5-100.4%范围内,结果满意。（2）在优化的合成条件下,在移液枪的枪头尖端制备了金属-有机杂化聚合物（MOPH）整体柱。通过层层自组装方法在聚合物孔表面合成Zr（Ⅳ）-2-氨基对苯二甲酸配位聚合物（Zr ATP）作为SPME介质,实现P-Ser的分离富集和HPLC-MS/MS分析。在聚合物整体柱中,以甲基丙烯酸（MAA）为功能单体与Zr ATP中金属离子作用,实现化学自组装。用红外光谱、扫描电镜、氮吸附、zeta电势和XPS光谱分析对材料的物理形貌和化学结构进行表征,探究了材料的吸附机理,优化了萃取条件,对SPME-LC-MS/MS方法进行考察,应用于猪肝样品中P-Ser的灵敏检测。该方法LOD（S/N=3）为2.2 ng g-1,日内日间RSD在2.8-5.7%范围内,回收率在93.6-104.0%范围内,实验结果良好。