论文部分内容阅读
目的:研究雌激素在体外培养PFD(pelvic floor dysfunction)患者的阴道壁成纤维细胞应力前后胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)、胶原蛋白Ⅲ(CollagenⅢ)、类赖氨酰氧化酶1 lysyl oxidase like 1(LOXL1)和纤维粘连蛋白fibrinectin(FN)表达的差异,探讨其在PFD发病中的作用。方法:1研究对象:选取2009年10月至2010年-9月,在河北医科大学第二医院妇科接受手术治疗的女性PFD患者12例的阴道壁组织。平均年龄为(58.3±9.6)岁,均为绝经后妇女。所有患者均按国际尿控协会(international continence society)1996年公布POP-Q(the pelvic organ prolapse quantitative examination)进行量化分期,所有患者临床至少有一个部位脱垂为Ⅲ～Ⅳ度。术前3个月内均未使用过激素类药物,均不合并结缔组织性等疾病,所取组织均经患者同意。2成纤维细胞培养:采用组织块法和酶消化法进行阴道壁成纤维细胞的原代培养,取3～5代稳定的传代成纤维细胞进行实验。MTT法测定细胞增殖率。3成纤维细胞应力:应用Flexcercell 4000柔性基底拉伸系统给细胞应力,应力后用不同浓度的17-β雌二醇继续培养48小时,不加力不加药组为对照组。4逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR):提取各组细胞的mRNA,进行RT–PCR,电泳照相并记录各观察指标在各组中的表达结果。结果:1细胞培养情况原代培养成功后,采用1:2比例进行传代分瓶。免疫组织化学方法进行鉴定,波形蛋白阳性、角蛋白、肌动蛋白阴性的鉴定为成纤维细胞。2细胞增殖情况应力前的阴道壁成纤维细胞在由低到高浓度17-β雌二醇作用下的增殖率分别为0.23、0.38、0.38、0.54。应力后分别为0.06、0.07、0.10、0.17、两者比较有统计学意义(P<0.05)。而且增殖率随药物浓度增大呈上升趋势。3应力前、后各因子的表达情况①CollagenⅠ的表达分别为1.1872±0.0733,1.5035±0.0733,二者比较有统计学意义(P<0.05)。②CollagenⅢ的表达分别为0.7229±0.0966,0.2024±0.0465,二者比较有统计学意义( P<0.05 )。③LOXL-1的表达分别为0.7724±0.1873 ,1.0855±0.0805,二者比较有统计学意义(P<0.05)。④FN的表达分别为0.4290±0.1168,0.4215±0.0830,二者比较无统计学意义(P>0.05)。4高药理浓度的17-β雌二醇作用下,CollagenⅠ、CollagenⅢ、LOXL-1、FN的表达分别为:3.0809±0.1862、1.3032±0.2994、1.5863±0.3241、1.1418±1.0030。与其他组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:1应力对体外培养PFD患者的阴道壁成纤维细胞的增殖有抑制作用, 17-β雌二醇有促进作用,且细胞增殖率随药物浓度的增加而上升;17-β雌二醇能在一定程度上反转应力对细胞增殖能力的抑制作用。2体外培养的PFD患者阴道壁成纤维细胞,在应力后细胞外基质成分CollagenⅠ、LOXL-1的表达上升而CollagenⅢ的表达下降,FN无明显变化。17-β雌二醇使应力后细胞合成细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)成分增加。3力和雌激素在PFD的发病机制中可能起了比较重要的作用。