【摘 要】
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目的:观察反油酸暴露致人脂肪细胞发生胰岛素抵抗情况,并探讨内质网应激在其中的作用。研究方法:体外培养人脂肪间质干细胞,诱导分化为成熟脂肪细胞。使其暴露于100μmol/L的
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目的:观察反油酸暴露致人脂肪细胞发生胰岛素抵抗情况,并探讨内质网应激在其中的作用。研究方法:体外培养人脂肪间质干细胞,诱导分化为成熟脂肪细胞。使其暴露于100μmol/L的反油酸(EA)及其同分异构体油酸(OA)24h。Western blot方法检测胰岛素受体底物-1的丝氨酸蛋白表达水平及葡萄糖转运蛋白-4的表达量。透射电镜下观察人成熟脂肪细胞超微结构,Western blot实验检测内质网应激相关蛋白(免疫球蛋白重链结合蛋白、肌醇需求激酶-1α、c-Jun氨基末端激酶)的表达。脂肪细胞事先于内质网应激抑制剂4-苯丁酸钠(4-PBA)中孵育2h,再使其暴露于反油酸(EA)24h,提取细胞总蛋白,采用Western blot方法再次检测内质网应激相关蛋白以及胰岛素受体底物-1的丝氨酸蛋白的表达水平。结果:人成熟脂肪细胞暴露于100μmol/L的反油酸(EA)及其同分异构体油酸(OA)24h后发现,100μmol/L EA暴露组的胰岛素受体底物-1的丝氨酸的磷酸化比例明显高于载体(1‰DMSO)组,差异具有统计学意义(P<0.01)。通过检测葡萄糖转运蛋白-4,结果表明100μmol/L EA暴露对人成熟脂肪细胞的葡萄糖转运能力无影响(P>0.05)。透射电镜下可见100μmol/L EA暴露组的人成熟脂肪细胞内质网发生扩张,局部扩张成池。与载体组相比,100μmol/L OA暴露未造成内质网应激相关蛋白表达发生明显差异;而100μmol/L EA暴露致使内质网应激相关蛋白的表达有明显差异且差异具有统计学意义(P<0.05)。内质网应激抑制剂4-苯丁酸钠(4-PBA)干预后,与EA暴露组相比,EA+4PBA暴露组的内质网应激相关蛋白表达水平均有所下调(P<0.05),胰岛素受体底物-1的丝氨酸蛋白磷酸化比例也降低(P<0.05),差异具有统计学意义。结论:反油酸暴露致人成熟脂肪细胞发生胰岛素抵抗,这可能是由内质网应激介导的。
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