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干扰素(Inferons,IFN)是调节细胞生长、分化、免疫反应、抗肿瘤及抗病毒等多种重要生理功能的细胞因子,通过IFN诱导干扰素刺激基因编码的蛋白家族(ISGs)组成的信号网络完成其信号传导过程。干扰素诱导的跨膜蛋白IFITM(inferon-inducible transmemberaneproteins)是系列ISGs中的一个家族,干扰素诱导后可大量表达。近几年发现IFITM蛋白可抑制多种病毒的复制。IFITM在人、畜、禽、鼠等多种生物中都有表达,在进化上也非常保守,但不同物种中报道的IFITM基因种类和数量都有一定的差异。人类共有IFITM1、IFITM2、IFITM3和IFITM5基因的表达,其中IFITM1、IFITM2和IFITM3广泛表达于多种组织中,而IFITM5仅在成骨细胞中发现。而鼠中除了有IFITM1、IFITM2、IFITM3、IFITM5外,还有IFITM6和IFITM7的存在。最近有文献报道IFITM蛋白具有抗甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)等一些黄病毒属病毒及艾滋病病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)等多种病毒的功能,引起了广泛关注。本论文主要以猪IFITM基因的序列、结构、表达及其对乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)的影响进行了研究。本论文主要研究结果有:1、IFITM基因的克隆及其序列分析。通过序列对比已知的IFITM基因的CDS区保守序列,设计特异性的引物,从猪肾细胞PK15中扩增出猪IFITM基因,提交序列至NCBI。2、IFITM基因的进化分析。以猪组织的总DNA为模板,扩增出IFITM1、IFITM2、IFITM3等3个基因的全长序列,经过分析和序列对比,三个基因都含有一个内含子,并确定这三个基因均位于猪的2号染色体上。在猪基因组中尚未发现完整的IFITM5和IFITM10。通过绘制系统进化树发现猪IFITM与牛(Bos taurus)IFITM基因的同源性最高达到77%以上,牛和鼠的IFITM5同源率高达90%以上。3、IFITM基因的组织表达分析。采集了猪的不同组织提取RNA,分别扩增IFITM1、IFITM2、IFITM3的基因序列,发现IFITM1、IFITM2和IFITM3在各组织中的表达有较大差异。IFITM1和IFITM3在一些组织(如肝和肾)中表达量较大,而IFITM2仅在猪脾脏组织中检测出有表达。4、抗JEV功能的初步分析。将猪的IFITM1、IFITM2和IFITM3分别连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,分别构建了三个重组质粒pcDNA3.1(+)-IFITM1、pcDNA3.1(+)-IFITM2和pcDNA3.1(+)-IFITM3,瞬时转染至PK15细胞,然后进行JEV感染实验,细胞病变分析及RT-PCR结果分析表明三组IFITM基因对JEV具有不同程度的抑制作用。5、稳定表达IFITM细胞系的构建。将构建好的三个重组质粒pcDNA3.1(+)-IFITM1、pcDNA3.1(+)-IFITM2和pcDNA3.1(+)-IFITM3,转染至PK15细胞,48小时后分析其表达情况,并用G418筛选10-15天,以建立IFITM1、IFITM2、IFITM3基因分别稳定表达的细胞系,以便于以后更深入的研究该基因的功能。