【摘 要】
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鱼肉品质受多种因素影响,除品种和遗传因素等先天因素之外,养殖环境是影响鱼肉品质的主要因素之一。温度作为一种重要的环境因子,在鱼类的生长和生理活动中发挥重要作用,然而温度是否会影响鱼类肌肉品质及其作用机制目前尚不清楚。本实验以模式生物斑马鱼(Danio rerio)为研究对象,设置了18℃(低温)、28℃(最适温度)和34℃(高温)三个温度组,每组3个重复,开展7周的养殖实验。通过分析不同温度下鱼体
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鱼肉品质受多种因素影响,除品种和遗传因素等先天因素之外,养殖环境是影响鱼肉品质的主要因素之一。温度作为一种重要的环境因子,在鱼类的生长和生理活动中发挥重要作用,然而温度是否会影响鱼类肌肉品质及其作用机制目前尚不清楚。本实验以模式生物斑马鱼(Danio rerio)为研究对象,设置了18℃(低温)、28℃(最适温度)和34℃(高温)三个温度组,每组3个重复,开展7周的养殖实验。通过分析不同温度下鱼体生长、体成分以及肌肉营养成分(氨基酸和脂肪酸)、肌肉组织结构、胶原蛋白含量及转录组变化,探讨温度对斑马鱼肌肉营养组成、组织结构和胶原蛋白含量的影响及可能分子机制,为水产养殖中通过环境调控改善鱼肉品质提供理论基础。主要研究结果如下:1.温度对斑马鱼生长及肌肉营养成分的影响生长方面,温度显著影响斑马鱼的终末体长和终末体重,其中28℃组具有最大的体长和体重,显著大于18℃组(p<0.05)。全鱼生化成分方面,与28℃组相比,18℃和34℃组的水分含量均无显著性差异,18℃组的粗蛋白和灰分含量均显著降低(p<0.05)。温度显著影响斑马鱼肌肉氨基酸组成以及EAA、NEAA、FAA和TAA的含量(p<0.05)。总体上,18℃和34℃组大部分氨基酸含量低于28℃组肌肉(p<0.05)。34℃组Tyr、Ala、Met、Leu、Arg、His和Gly含量显著低于28℃组(p<0.05),而18℃组仅Pro、Met、Leu和His含量显著低于28℃组(p<0.05)。另外,34℃组EAA、NEAA、FAA和TAA均显著低于28℃组(p<0.05),18℃组NEAA和TAA含量显著低于28℃组(p<0.05)。温度对肌肉脂肪酸组成也有一定的影响,18℃和34℃组总饱和脂肪酸含量均显著高于28℃组(p<0.05)。其中,34℃组C16:0含量显著高于28℃组(p<0.05);18℃和34℃组C18:0和C18:1T含量均显著高于28℃组(p<0.05)。2.温度对斑马鱼肌肉组织结构和胶原蛋白含量的影响组织形态学分析发现,与28℃相比较,18℃和34℃均会导致肌纤维平均直径增大,密度减小,排列较疏松(p<0.05)。天狼星红染色分析发现,18℃可提高肌肉组织胶原蛋白含量(p<0.05)。进一步,通过Western blot发现18℃组肌肉组织的I胶原蛋白的表达量显著高于28℃组和34℃组(p<0.05)。这些结果表明,温度显著影响斑马鱼肌肉组织结构和胶原蛋白含量。3.温度对斑马鱼肌肉品质相关基因表达的影响为了探讨温度影响斑马鱼肌肉品质的可能机制,本研究对不同温度处理组肌肉组织进行转录组测序,分析不同温度处理组间DEGs数量、GO成分和KEGG通路富集情况。结果发现,随着温度差异的增大,DEGs的数量增多;18℃vs 28℃组DEGs富集的KEGG通路主要有氧化磷酸化作用、氨基酸的生物合成、精氨酸和脯氨酸代谢等;28℃vs 34℃组富集的通路主要是氨酰-t RNA的生物合成、RNA转运、蛋白酶体等;18℃vs 34℃组,富集的通路主要涉及真核生物核糖体的生物合成、氨酰-t RNA的生物合成、内质网中的蛋白质加工、RNA转运、精氨酸和脯氨酸的代谢等。进一步我们通过q RT-PCR对肌肉品质相关的DEGs的表达模式进行验证,验证结果与转录组测序基本一致。肌肉生长和发育相关基因方面,随着温度的升高,myf6的表达水平显著增加,mef2cb和myog的表达水平则显著减少(p<0.05)。精氨酸与脯氨酸代谢方面,arg2的表达水平随温度升高而显著下调,与gatm的表达趋势相反,pycr1b的表达水平在18℃组显著低于28℃和34℃组(p<0.05)。胶原蛋白合成基因方面,大部分胶原蛋白基因(col1a1a、col1a2、col2a1b等)的表达水平随着温度升高而显著减少(p<0.05)。胶原蛋白代谢调控基因方面,MMPs(mmp2、mmp9、mmp14a、mmp14b、mmp15a)、TIMP2(timp2a、timp2b)和TGF-β1(tgfb1a、tgfb1b)的表达水平总体上随着温度升高而显著减少(p<0.05);CTGF(ctgfa、ctgfb)的表达水平在34℃组显著下降(p<0.05);SERPINH1(serpinh1a、serpinh1b)的表达水平随温度升高而增加(p<0.05)。在内质网蛋白质加工通路上,PDIs(p4hb、pdia4)、热休克蛋白基因(hsp70、hsp40)和sec24a等的表达水平总体上随温度升高而上调(p<0.05),与man1b1b、edem3的表达趋势相反(p<0.05)。这些结果表明,温度可能通过调节肌肉生长发育、氨基酸代谢、胶原蛋白代谢及蛋白质加工等基因表达从而影响肌肉品质。
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