碱性脂肪酶产生菌扩展青霉改良系谱的遗传变异研究

来源 :福建师范大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:zzhijian
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本课题对碱性脂肪酶产生菌扩展青霉(Penicillium expansum)系谱内不同产酶水平的改良突变株进行遗传变异分析,作为寻找与扩展青霉脂肪酶(PEL)合成相关的调控因子的基础,为扩展青霉的分子育种提供基础数据。 使用132个有效引物对扩展青霉系列改良突变株进行RAPD多态性检测,检测到条带752个,其中多态条带298个,多态条带比率39.63%。11株菌间平均Jaccards相似系数为0.8602,来自扩展青霉改良系谱的10个突变株间的平均相似系数为0.8775。用UPGMA法构建分子系统进化树,将供试菌划归A、B、C三大类:参考菌株CGMCC3.5175构成A类;改良系谱出发菌株UNS03和系谱后期突变株FS1503构成B类;其余8株构成C类。主坐标分析结果与聚类分析结果相一致。结果发现突变株S14与出发菌株UN503遗传相似系数小于其系谱后代突变株与UN503的相似系数,与原始系谱各突变株系统发生不完全一致,说明扩展青霉改良过程,突变的随机性、不定向性会使各改良菌株之间的遗传关系复杂化。 根据扩展青霉系谱改良变株PF898已知的PEL (Penicillium expansum lipase J结构基因及5端侧翼区序列,扩增出改良系谱内8株菌的PEL结构基因和5端侧翼区序列,并进行测序。对系谱内8株变株的PEL结构基因和5`端侧翼区序列共2922 bp基因序列进行比对,共发现22个点突变位点。其中在PEL结构基因外显子序列内有9个点突变位点,4个位点发生氨基酸错义突变,5个位点发生同义突变。发生氨基酸错义突变的3个突变株(FS1503,W468和F1382)的产酶水平在系谱中都处于低酶活水平。1个突变位点发生于变株FS1503脂肪酶基因的内含子2的保守末端剪接区域内。5端侧翼区内有12个点突变位点。其中1个突变点位于可能的启动子区。对该序列进行可能转录因子结合位点分析,有11个真菌类的转录因子可能结合于5端侧翼区上。其中发生在变株FS1503与W392的2个突变位点,由于碱基的突变导致3个转录因子(HSF,PHO4,stuAp)的结合发生变化。这些位点的变化都很可能与产酶水平相关,有关这些变异的功能尚需进一步验证。
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