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本研究以实验室保存的奶油木霉(Trichoderma cremeum)菌株BM48-3为出发菌株,分析已发表木霉的纤维二糖水解酶Ⅰ序列两端保守区,设计简并引物,以BM48-3的基因组DNA为模板,PCR扩增克隆得到奶油木霉BM48-3的纤维二糖水解酶Ⅰ的全长DNA序列,该基因命名为Tccel7A。以第一链cDNA为模板,扩增克隆得到Tccel7A的完整cDNA序列。BM48-3的Tccel7A完整DNA序列长度为1653 bp,Tccel7A全长cDNA序列长1530 bp,对比可知Tccel7A全长DNA序列其中包含3个外显子和2个内含子。第一个内含子长度为61bp,第二个内含子长度为62bp。经Blast比对,Tccel7A的完整DNA序列与绿色木霉(Hypocrea virens)UKM1菌株的cbhI序列一致性为80%。Tccel7A全长cDNA序列与哈茨木霉的cbhI完整cds序列一致性为80%。经预测,Tccel7A全长cDNA序列编码510个氨基酸,编码的蛋白分子量理论值为53.0kDa,pI为4.40。提交SMART网站分析,由Tccel7A翻译得到的全长氨基酸序列中,1～17位为信号肽序列,19～444位是糖苷水解酶家族7的催化功能域(CD),476～509位是典型的真菌纤维素结合功能域(CBM)。经BlastP对,全长Tccel7A氨基酸序列与得分最高的哈茨木霉的cbh I氨基酸序列一致性为83%。将去除信号肽和终止子的Tccel7A与毕赤酵母表达载体pPICZαA和pPIC9K相连,构建重组质粒pGXNαA4831和pGXN9K4831,转化毕赤酵母感受态细胞,构建重组毕赤酵母GXNαA4831和GXN9K4831。筛选得到酶活力最高菌株GXN9K4831-16,经过镍柱纯化得到重组蛋白,命名为TcCe17A。纯化后的TcCe17A经SDS-PAGE分析分子量大小稍大于53 kDa,经酶谱分析显示有活性条带。TcCe17A的最适作用pH约为5.0,最适作用温度约为45 ℃,在pH4.5～5.5以及45 ℃以下有较好的稳定性。DTT和SDS分别是最强的激活剂和抑制剂,CaCl2和CuCl2分别是最强的金属离子激活剂和金属离子抑制剂。TcCe17A对包括不可溶纤维素的各种底物(木聚糖除外)普遍有酶活力,但酶活力都比较低。其中对人工合成底物p-NPC的酶活力最高。TcCe17A对滤纸的主要水解产物是纤维二糖,副产物是纤维三糖和纤维四糖。最适作用条件下,以p-NPC为底物,TcCe17A 的 Km为 2.43 mM,Vmax 为 1.32 μmol pNP/min.mg。为今后深入研究纤维素酶降解纤维素能力高低的原因,对解决纤维素酶酶活力普遍偏低而无法实现大规模使用纤维素酶转化木质纤维素生产生物乙醇这个瓶颈问题是非常有意义的。