【摘 要】
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目的:该课题拟以分子生物学技术扩增、克隆恙虫病东方体Karp株47kDa蛋白基因,构建大肠杆菌表达质粒,研究重组蛋白的免疫学特性,便于后续的诊断学研究.构建能在哺乳动物细胞表
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目的:该课题拟以分子生物学技术扩增、克隆恙虫病东方体Karp株47kDa蛋白基因,构建大肠杆菌表达质粒,研究重组蛋白的免疫学特性,便于后续的诊断学研究.构建能在哺乳动物细胞表达的质粒,实现47kDa蛋白的体外表达,并对质粒的核酸免疫作初步探讨.结论:①该实验克隆扩增了恙虫病东方体Karp株成熟肽全基因序列;②构建了含47kDa蛋白成熟肽序列的原核表达质粒pGEX-47;③在大肠杆菌表达出了GST-47融合蛋白,切割纯化的47kDa表达蛋白具有抗原性和免疫原性;④构建了含47kDa蛋白成熟肽序列的真核表达质粒pVAX1-47,并含有CpG免疫佐剂DNA序列;⑤pVAX1-47以脂质体法转化了哺乳动物Hela细胞,在Hela细胞表达的47kDa蛋白具有抗原性;⑥真核表达质粒pVAX1-47接种小鼠初步观察发现其有一定的核酸免疫效果.
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