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目的:越来越多的研究结果显示,miRNA在肺癌的发生发展过程中起着重要的作用。在本研究中,我们利用实时定量real time PCR技术检测非小细胞肺癌组织相对于癌旁正常组织中miR-10b的差异表达,并通观察在肺癌细胞株中过表达miR-10b对肺癌细胞生长、侵袭及转移的影响,以及miR-10b靶基因的预测及验证,初步探索miR-lOb在非小细胞肺癌的发生、发展中的作用及其机制。方法:1,采用RT-PCR法检测miR-lOb在非小细胞肺癌组织中的差异表达;2,采用RT-PCR法检测miR-10b在A549细胞株、95-C细胞株中的表达情况,将实验分为三个组:空白对照组,阴性对照组,miR-10b质粒转染组,构建miR-10b过表达质粒及阴性对照质粒,将miR-10b过表达质粒及阴性对照质粒采用脂质体法瞬转至A549及95-C细胞株中,转染后荧光显微镜下观察转染效率,RT-PCR法检测各组细胞中niR-10b勺相对表达量。通过细胞增殖实验(CCK8)观察转染后各组细胞的增殖能力的变化;通过流式细仪检测各组细胞的细胞周期及凋亡的变化,Transwell侵袭实验检测各组细胞侵袭能力的变化,细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力的变化;3,使用生物信息学方法对miR-10b的靶基因进行预测,并采用荧光素酶报告基因实验、RT-PCR及Westblot进行初步验证。结果:1,在40例非小细胞肺癌组织及配对的癌旁组织中,miR-10b在肺癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.05),有淋巴结转移组niR-10b表达水平高于无淋巴结转移组(p<0.05)。2, miR-10b在A549细胞及95-C细胞中相对高表达(P<0.05),转染后miR-10b质粒转染组细胞增殖速度明显增快,细胞凋亡率降低,细胞侵袭及迁移能力增强,差异有统计学意义(P<0.05)。3,经生物信息软件预测,我们筛选出KLF4作为miR-10b的靶基因。我们构建两个KLF4的3’UTR片段的荧光素酶报告基因载体,共转染miR-lOb质粒和KLF4-3’UTR-wt报告基因载体时,荧光素酶活性降低35%;共转染miR-10b质粒和预测靶位点突变载体KLF4-3’UTR-mut时,荧光素酶活性未见明显改变。在A549细胞及95-C细胞株中miR-10b质粒转染组KLF4mRNA表达降低,但与空白对照组和阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05); miR-10b质粒转染组KLF4蛋白表达降低,与空白对照组和阴性对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1, miR-10b在非小细胞肺癌组织中的表达高于癌旁正常组织中的表达,并且和淋巴结转移相关;2, miR-10b可促进肺癌细胞的增殖,抑制肺癌细胞的凋亡,增强肺癌细胞的侵袭及迁移能力;3,KLF4是miR-10b的直接靶基因,miR-10b可能过下调KLF4蛋白的表达促进非小细胞肺癌细胞的增殖及侵袭能力。