MicroRNA-10b在非小细胞肺癌中的表达及功能的研究

来源 :新疆医科大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:artec1
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:越来越多的研究结果显示,miRNA在肺癌的发生发展过程中起着重要的作用。在本研究中,我们利用实时定量real time PCR技术检测非小细胞肺癌组织相对于癌旁正常组织中miR-10b的差异表达,并通观察在肺癌细胞株中过表达miR-10b对肺癌细胞生长、侵袭及转移的影响,以及miR-10b靶基因的预测及验证,初步探索miR-lOb在非小细胞肺癌的发生、发展中的作用及其机制。方法:1,采用RT-PCR法检测miR-lOb在非小细胞肺癌组织中的差异表达;2,采用RT-PCR法检测miR-10b在A549细胞株、95-C细胞株中的表达情况,将实验分为三个组:空白对照组,阴性对照组,miR-10b质粒转染组,构建miR-10b过表达质粒及阴性对照质粒,将miR-10b过表达质粒及阴性对照质粒采用脂质体法瞬转至A549及95-C细胞株中,转染后荧光显微镜下观察转染效率,RT-PCR法检测各组细胞中niR-10b勺相对表达量。通过细胞增殖实验(CCK8)观察转染后各组细胞的增殖能力的变化;通过流式细仪检测各组细胞的细胞周期及凋亡的变化,Transwell侵袭实验检测各组细胞侵袭能力的变化,细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力的变化;3,使用生物信息学方法对miR-10b的靶基因进行预测,并采用荧光素酶报告基因实验、RT-PCR及Westblot进行初步验证。结果:1,在40例非小细胞肺癌组织及配对的癌旁组织中,miR-10b在肺癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.05),有淋巴结转移组niR-10b表达水平高于无淋巴结转移组(p<0.05)。2, miR-10b在A549细胞及95-C细胞中相对高表达(P<0.05),转染后miR-10b质粒转染组细胞增殖速度明显增快,细胞凋亡率降低,细胞侵袭及迁移能力增强,差异有统计学意义(P<0.05)。3,经生物信息软件预测,我们筛选出KLF4作为miR-10b的靶基因。我们构建两个KLF4的3’UTR片段的荧光素酶报告基因载体,共转染miR-lOb质粒和KLF4-3’UTR-wt报告基因载体时,荧光素酶活性降低35%;共转染miR-10b质粒和预测靶位点突变载体KLF4-3’UTR-mut时,荧光素酶活性未见明显改变。在A549细胞及95-C细胞株中miR-10b质粒转染组KLF4mRNA表达降低,但与空白对照组和阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05); miR-10b质粒转染组KLF4蛋白表达降低,与空白对照组和阴性对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1, miR-10b在非小细胞肺癌组织中的表达高于癌旁正常组织中的表达,并且和淋巴结转移相关;2, miR-10b可促进肺癌细胞的增殖,抑制肺癌细胞的凋亡,增强肺癌细胞的侵袭及迁移能力;3,KLF4是miR-10b的直接靶基因,miR-10b可能过下调KLF4蛋白的表达促进非小细胞肺癌细胞的增殖及侵袭能力。
其他文献
通过关注吸入麻醉剂对手术室工作人员的影响,就麻醉废气排放系统的技术装置做一介绍,以减少麻醉废气对手术室工作人员的身体伤害。
《串雅》是清代赵学敏将铃医赵柏云行医经验结合本人多年搜集及临床累积的资料分门加以整理而成,分为内、外编。赵氏博学医工,兼通天文卜学,时常躬亲药圃,广收验秘单方,名噪江浙。
应用地理信息系统开发的林业生态工程信息管理系统,建立林业生态工程建设空间数据库,会大大提高林业生态工程管理的效率和水平。本文论述了基于GIS"日元贷款陕西植树造林项目
<正>现在城市中有不少男人都是有自己的一道或几道拿手菜的,我的不少男同事常常一不小心就顶着一头油烟味来到单位。我一直认为,男人如果乐意下厨,那么他该算是一个富有生活
目的:探讨安普贴联合极化液外敷治疗高龄患者Ⅱ、Ⅲ期压疮效果评价。方法:高龄患者56例,随机分为实验组和对照组各28例,实验组用极化液外涂,再将相应大小安普贴贴于创面上;对
目的:根据氧疗特点和临床实际情况,设计提供一种实用湿化氧疗系统,可以实现最佳氧疗。方法:由文丘里空氧混合阀,加温湿化器和湿化氧疗加热丝管路组成高流量湿化氧疗系统。结
土地革命战争时期,中国共产党人在全面译介马克思主义货币学说的基础上,将这一学说应用于农村革命根据地的建设,形成了包括实行商品经济、利用货币关系摧毁旧货币机构和建立
目的 对滴丸剂型的制备工艺进行研究。方法与结果 通过对联苯双脂滴丸制备过程的试验 ,确定了联苯双脂滴丸的重量、处方组成与制备工艺 ,讨论了影响滴丸成形、丸的圆整度和