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桦木酸(Betulinic acid,BA)是一种植物源性五环三萜类物质,具有提高机体免疫力、抗氧化应激和抗炎等多种生物学活性,作为免疫调节剂和抗氧化剂在动物健康养殖方面具有广阔的应用前景。前期研究发现BA能提高断奶仔猪肠道抗氧化能力,修复肠黏膜形态结构,降低仔猪腹泻率。BA对肠道的保护作用可能与其调控肠道氧化应激和肠道炎症反应,改善肠黏膜屏障功能有关。但具体调控机制如何?迄今未见报道。因此,本研究采用T-2毒素诱导肠黏膜氧化损伤模型,探究BA对T-2毒素致小鼠小肠黏膜氧化损伤的保护作用,从肠道紧密连接相关蛋白mRNA的表达以及NF-κB信号通路相关蛋白表达来阐明BA对小肠黏膜的保护机制。目的:阐明BA对T-2毒素致小肠黏膜损伤的保护作用及其机制,为胃肠道抵御氧化损伤,促进肠道健康提供调控靶点和营养干预手段。方法:将60只健康雄性KM小鼠,随机分为6组,分别为对照组,T-2毒素组,BA低、中、高剂量(0.25 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg)+T-2毒素组,维生素E(Vitamin E,VE)+T-2毒素组。对照组和T-2毒素组灌服1%可溶性淀粉,BA和VE混悬于1%的可溶性淀粉中灌胃,1次/d,连续灌胃14 d后,除空白对照组注射PBS+酒精混合液外,其余各组腹腔注射T-2毒素(4 mg/kg,1ml酒精溶解,12.5ml PBS稀释),建立肠黏膜氧化损伤模型。禁食15 h(自由饮水)后,眼球收集血液,并无菌取小肠。检测十二指肠、空肠和回肠组织中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)的水平;采用ELISA法检测空肠脂肪酸结合蛋白(Intestinal fatty acid binding protein,IFABP)、分泌性免疫球蛋白(Secretory immunoglobulin A,SIgA)、补体C3(Complement 3,C3)和C4水平以及血清中免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)、免疫球蛋白M(Immunoglobulin M,IgM)和二胺氧化酶(Diamine oxidase,DAO)水平;H&E染色法观察肠绒毛结构以及透射电镜法观察肠道超微结构变化;荧光定量PCR检测肠黏膜紧密连接相关蛋白封闭蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白(Zonula occludens-1,ZO-1)、白细胞介素1β(Interleukin-1beta,IL-1β)、白细胞介素6(Interleukin6,IL-6)、白细胞介素10(Interleukin10,IL-10)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA的表达;采用Western blot检测肠道中核转录因子-κB(Nuclear transcription factor-kappa B,NF-κB)信号通路NF-κBp65和蛋白激酶α(Protein kinase alpha,IKB-α)蛋白表达及其磷酸化水平。结果:(1)BA预处理缓解了T-2毒素引起肠道CAT、GSH-PX等抗氧化酶活性下降,提高肠道GSH水平,降低MDA含量,提高肠道抗氧化能力;(2)BA预处理引起肠道中SIgA水平以及血清中IgG、IgM水平的升高,恢复肠道C3和C4水平,从而改善肠道免疫屏障;(3)BA预处理后,降低了肠道中IFABP和血清中DAO水平,从而提高肠道的化学屏障;(4)BA预处理能提高小鼠肠黏膜紧密连接相关蛋白ZO-1和Occludin mRNA的表达,改善T-2毒素致肠绒毛形态与结构的损坏,从而提高肠道的物理屏障;(5)高剂量的BA抑制T-2毒素致肠道中P-NF-κBp65/NF-κBp65和P-IKB-α/IKB-α蛋白的表达量,但BA各剂量组均能抑制肠道促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达,促进抗炎因子IL-10 mRNA的表达,说明BA可能抑制NF-κB信号通路的活化。结论:BA通过提高肠道抗氧化能力,抑制炎症因子的分泌,修复小肠黏膜屏障,对T-2毒素致肠黏膜损伤具有预防性保护作用,这种保护作用可能与抑制NF-κB信号通路活化有关。