急性脊髓损伤后外周血淋巴细胞亚群的改变及其意义

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背景 急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是脊柱外科领域中一种常见的疾病,多由高处坠落、交通事故、工业和建筑业事故以及运动伤所造成。多发于年轻人,可导致患者感觉、运动和植物神经功能的永久性丧失,给患者造成巨大的痛苦,无论对个人或社会都带来巨大负担。一个多世纪以来,在各国神经外科医师和骨科医师的不懈努力下,脊髓损伤的创伤急救水平不断地提高,脊髓损伤患者的死亡率已从20世纪初的50%左右降至目前的6%左右。脊髓损伤直接导致的早期死亡率已明显下降,但创伤治疗后期因感染直接或间接导致的死亡率则相对升高。 人们在上世纪70年代就注意到了创伤后机体免疫反应受抑制的现象,包括白细胞趋化能力减弱,吞噬杀菌功能降低,粒细胞功能下降,单核细胞-巨噬细胞功能减退,B淋巴细胞合成抗体水平下降和T淋巴细胞转化能力降低等。上世纪80年代以后,人们认识到创伤后免疫功能的抑制是导致感染的主要原因。研究表明,急性脊髓损伤后患者的细胞免疫功能受到抑制,脊髓损伤可引起机体非特异及特异性免疫功能障碍,而在特异性免疫中尤以细胞免疫功能受损为重,主要是T细胞的功能及自然杀伤细胞(NK细胞)的功能等受到抑制,表现为机体外周血T淋巴细胞转化作用及活化作用降低、对促细胞分裂剂增殖反应降低、可溶性IL-2受体水平升高、NK细胞的数量及细胞毒活性降低等,这些可能是导致伤后机体容易发生感染的主要原因。此外,另有研究表明,大鼠不完全性脊髓损伤后损伤的脊髓可诱导机‘用二军医才学厚全学夕居戈功戈拥要.体产生T细胞介导的保护性自身免疫反应,从而减轻损伤后神经元的退变来促进脊髓功能恢复;若脊髓损伤后机体发生了感染如病毒感染,则会导致脊髓损伤区淋巴细胞浸润增强,会进一步加重脊髓损伤。临床工作中还发现,尿道、肺及皮肤等处的机会性感染常见于脊髓损伤患者。因此,除感染时应用抗生素等药物治疗外,伤后提高机体的免疫功能以预防、避免感染的发生,对减少患者晚期并发症、降低后期的死亡率及提高其生活质量具有特别重要的意义。 迄今研究结果表明,脊髓损伤与免疫反应改变密切相关,己引起学者们的重视,但无定论。因此,更深入地了解脊髓损伤后机体的细胞免疫反应改变情况、随时间变化的规律及其机理,研究并采取一些有效的措施来调节伤后机体的细胞免疫受损状况,是一个具有重要意义并巫待解决的的课题。 目的 我们设计并实施本课题,目的在于研究脊髓损伤后机体T淋巴细胞亚群、活化抗原及粘附分子的变化情况,探讨SCI与细胞免疫反应的关系及其机理;在此基础上,研究并探讨传统中药黄茂在急性脊髓损伤中调节细胞免疫反应的作用,为该药在SCI治疗中的应用提供理论依据。 方法 1.利用改良Allen’s打击法建立致伤能量不同的大鼠急性脊髓损伤模型。 2.采用流式细胞仪检测正常对照组、手术对照组(仅行椎板切除而未损伤脊髓)及致伤能量不同的二组脊髓损伤组大鼠伤后不同时期外周血T淋巴细胞表型CD;及CD:的表达水平,研究 CD4、CDS、CD扩CDS比值及CD4+CD:值随时间变化的规律及不同致伤能量对cD;及cD:表达的影响,进一步了解SCI后大鼠细胞免疫反应的改变情况。‘翩二军医丈学麟全李夕绘戈礴功戈有萝 3.对二组急性脊髓损伤大鼠,在伤后第12h、36h、sd、6d、7d、sd及gd分别给予生理盐水注射液和黄茂注射液治疗,通过流式细胞仪检测治疗后不同时期大鼠外周血T淋巴细胞表型C环和CD:的表达水平,来观察治疗前后细胞免疫反应改变情况。此外观察胸腺、脾脏的外观形态、重量的变化及其组织病理学变化,研究黄茂注射液对急性脊髓损伤大鼠细胞免疫受损的调节作用。 4.采用流式细胞仪检测15例临床确诊的急性脊髓损伤患者外周血淋巴细胞表型CD:9、CD3、CD4、CDS、CD69、CDS;及CD56的表达水平,了解脊髓损伤后患者细胞免疫功能的改变情况及其机理。 结果 通过上述实验研究,得出如下结果: 1.术后第36h斜板试验角度:各组比较结果表明,手术对照组明显低于正常对照组(p<0.01),脊髓损伤组明显低于正常对照组及手术对照组(p<0.01),而脊髓损伤组中SCI 200gcm组又明显低于SCI100gem组(p<0.01)。此外,SCI 20ogem组双后肢运动、感觉恢复最慢。 2.CD;值:术后第12h脊髓损伤组及手术对照组该值均明显低于正常对照组(p<0.05),至术后第36h仍均明显低于正常对照组,且具有非常显著性差异(p<0.01);此外,术后第36h时sel Zoogem组CD;值明显低于手术对照组,而SCI loogcm组与手术对照组比较的p值为0.0542,虽无显著性差异,但接近p<0.05,表明二者有显著性差异的趋势。术后第5d各组C珠值仍均明显低于正常对照组(p<0.05)。术后第gd时的eD;值,除sCx Zoogem组仍明显低于正常对照组(p<0.05)外,其余各组则与正常对照组无明显的差异。方差分析结果表明:手术对照组术后不同的时期的CD;值无明显的差异(p>0·05);sCI 10ogem组及SCI 200罗m组术后不同时期的en;值间存
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