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口服胰岛素制剂的研究为糖尿病治疗提供了新的途径,与皮下注射胰岛素不同,口服给药途径可以改善糖尿病病人的生活质量。近年来,不同类型的口服胰岛素制剂被广泛研究,例如纳米粒子、纳米囊泡、微囊、微球、脂质体等。本论文选用纳米囊泡作为口服胰岛素制剂,并对其体内体外性能进行研究。不同于核壳结构的球形纳米粒子,纳米囊泡具有双层结构,既可以包埋亲水性药物,又可包埋疏水性药物,类似脂质体,但其临界胶束浓度(critical micelle concentration,CMC)比脂质体小,稳定性比脂质体高;并且纳米级尺寸的粒子更易被细胞摄取。另外,基于小肠上皮细胞中的叶酸受体(Folate receptor)过度表达,可以将叶酸作为靶向配体基团修饰纳米囊泡,进一步促进细胞对纳米囊泡的摄取,提高药物的生物利用度。本论文首先制备了含有叶酸靶向基团的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(FA-P85-PLGA)与非靶向聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA-P85-PLGA),经纳米沉降法制得纳米粒子。利用透射电镜和粒度仪对PLGA-P85-PLGA和FA-P85-PLGA的内部形貌和粒径大小进行观察,发现二者均可以在水中集聚形成双层纳米囊泡(polymersome),且粒径大小分布在70-110 nm之间。利用Micro BCA对PLGA-P85-PLGA和FA-P85-PLGA纳米囊泡中胰岛素(insulin)的释放特性进行了探究,释放结果显示初始的突释以及随后的缓慢释放。以Caco-2(人结肠癌细胞)作为细胞模型,对靶向纳米囊泡的体外性能进行了研究。通过MTT比色法证明了空白纳米囊泡具有良好的生物相容性。本文通过荧光定性的方法,将异硫氰酸荧光素标记的胰岛素(FITC-insulin)包埋进FA-P85-PLGA和PLGA-P85-PLGA囊泡中,发现囊泡与FITC-insulin被细胞摄取后,均分布在细胞质中;并且荧光定性与定量实验结果共同显示,细胞对纳米囊泡的摄取具有时间依赖性;FITC-insulin loaded FA-P85-PLGA的细胞摄取量高于FITC-insulin loaded PLGA-P85-PLGA,而细胞对free FITC-insulin的摄取能力最差。通过细胞摄取途径实验也验证了细胞对纳米囊泡的摄取是能量依赖型的主动运输过程,对FA-P85-PLGA和PLGA-P85-PLGA纳米囊泡的摄取途径均包括网格蛋白介导的内吞、小窝蛋白介导的内吞和巨胞饮。此外,细胞对FA-P85-PLGA纳米囊泡的摄取还包括叶酸受体介导的内吞途径。对诱导成功的糖尿病大鼠口服载药纳米囊泡,来探究靶向纳米囊泡的体内性能。体内降血糖实验结果显示,包埋胰岛素的FA-P85-PLGA(50 IU/kg)、包埋胰岛素的PLGA-P85-PLGA(50 IU/kg)组与皮下注射(5 IU/kg)组相比,降血糖效果更加持久,并且不会出现低血糖现象;体内药物代谢实验显示,口服纳米囊泡组的达峰时间为6 h,而皮下注射组的达峰时间为1 h,由此也可证明口服囊泡组的大鼠降血糖比皮下注射组更加持久。此外,从药代实验中可见,口服包埋胰岛素的FA-P85-PLGA组的达峰浓度为35.8±5.27μIU/mL,而口服包埋胰岛素的PLGA-P85-PLGA组的达峰浓度为27.6±3.67μIU/mL,并且口服靶向组的生物利用度(BA_R%)和药时曲线下面积(AUC)分别是非靶向组的1.3倍和1.27倍。综上,含叶酸靶向的纳米囊泡FA-P85-PLGA在口服胰岛素制剂方面具有潜在的应用价值。