乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是一个全球性的健康问题。尽管目前乙肝疫苗的使用能保护大多数人免受乙肝病毒的侵袭,临床上多种抗病毒治疗药物亦能较好地改善慢性HBV感染者的健康状况,但依然无法完全清除HBV。临床HBV慢性感染患者,可能会发展成为无法治愈的肝硬化,甚至肝癌。由于HBV感染致病的分子机制尚不明确,探索HBV与宿主肝细胞的相互作用,阐明HBV致病机制是极其重要的。已有文献报道HBV感染导致宿主蛋白质发生多种翻译后修饰,其中泛素化修饰参与调控多种生理功能。然而目前尚未有研究系统地检测HBV感染导致的宿主蛋白质组泛素化修饰变化。我们利用细胞培养条件下稳定同位素标记技术(SILAC)技术定量研究HBV感染前后HepG2细胞系的蛋白质组泛素化修饰。鉴别到多个泛素化修饰有显著变化的宿主蛋白以及关键修饰位点,从鉴别到的蛋白质中,我们发现HBV感染后葡萄糖转运子1(GLUT1)蛋白水平显著上调,泛素化显著下调。早期报道中发现肿瘤细胞会发生代谢重编程,摄取更多的葡萄糖作为糖酵解的原料。而GLUT1作为葡萄糖转运子,是糖酵解的限速步骤。由此,我们推测HBV可能通过调控某(几)个去泛素化酶下调GLUT1泛素化进而上调GLUT1的蛋白水平,从而增加葡萄糖的摄入。首先,我们在HepG2细胞和Huh7细胞中转染GLUT1和pHBV1.3质粒,利用免疫沉淀实验发现GLUT1的泛素化显著下调。并且发现HBV下调的是GLUT1特异的K48泛素化。随后我们在HepG2细胞和Huh7细胞中转染pUC18和pHBV1.3质粒,利用蛋白印迹实验发现GLUT1的蛋白水平上调。同时利用实时荧光定量PCR技术检测GLUT1的mRNA水平,发现HBV感染不影响GLUT1的转录。接着,我们发现使用26S蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞后GLUT1的泛素化增加,证实GLUT1的泛素化与蛋白酶体降解相关。为了寻找下调GLUT1泛素化的去泛素化酶,我们在HepG2.2.15细胞过表达GLUT1-FLAG,通过免疫共沉淀实验沉淀与GLUT1存在相互作用的蛋白质,然后进行质谱鉴定。我们鉴别到COP9信号体亚基5(CSN5)可能与GLUT1存在相互作用,随后通过免疫共沉淀实验表明CSN5和GLUT1存在相互作用。进一步实验发现在HepG2.2.15细胞中过表达CSN5能上调GLUT1的蛋白水平,敲低CSN5能下调GLUT1的蛋白水平,并且外源转染CSN5能回复GLUT1的蛋白水平。同时,CSN5能下调GLUT1的K48泛素化。然而HBV并不影响CSN5的表达。随后的研究中我们发现HBV的HBs蛋白与GLUT1存在相互作用,同时我们发现HBs也能与CSN5相互作用。免疫共沉淀实验证实HBs,CSN5和GLUT1三者存在相互作用。随后在HepG2.2.15细胞中敲低HBs后,蛋白印迹实验显示GLUT1的蛋白水平显著下调。以上实验表明HBV可能通过其HBs蛋白结合宿主CSN5及GLUT1蛋白,并调控GLUT1的泛素化修饰与蛋白质水平。