hrmA诱导水稻抗病性的研究

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从丁香假单胞菌(Psuedomonas syringae pv.syringae)中分离的hrmA基因是在寄主烟草上具有类似无毒基因功能的基因。而且,P.s.syringae处理水稻能诱导水稻产生抗病性。本研究主要是对转hrmA基因水稻的抗病性进行研究分析。 首先对转hrmA基因植株进行了观察和分子生物学鉴定。温室中生长正常小苗移栽至实验大田生长、结实。根据后期死亡与否、以及结实情况分为三大类,第一类,未及抽穗或者抽穗阶段死亡的9个株系;第二类,产生少量穗子但未能结实的8个株系;第三类,正常抽穗和结实的18个株系。本研究中所涉及的株系为11个正常抽穗和结实的第三类株系。PCR检测T1代以及T2代转基因的各个株系,得到了8个阳性株系。Northern Blot分析检测不到这些株系中hrmA基因的表达,RT—PCR分析发现这些株系间hrmA基因的表达丰度有差异,而CamV35S和Pal启动子两种不同启动子驱动的转基因水稻中的hrmA基因表达丰度没有明显的差异。 其次对转基因水稻的稻瘟病菌抗性进行了分析。对野生型非转基因水稻致病稻瘟病菌97-220E3活体接种的病情统计结果表明,转基因水稻的病情要弱一两个等级。Northern Blot和RT-PCR分析显示了稻瘟病菌接种前后,转基因苗的PAL、pBZ1和Gluc等病程相关基因的表达丰度都要比野生型水稻有所提高,甚至表现为弱组成性的表达。这说明hrmA基因诱导水稻对稻瘟病菌的抗性提高,而这种抗性提高可能是通过hrmA基因诱导病程相关基因的提高起作用。 最后研究了植物特有的WRKY转录因子家族参与hrmA基因诱导水稻抗性提高的基因。采用简略阵列分析了转基因样以及稻瘟病菌诱导样中WRKY基因和一些病程相关基因(PRs)的变化,89个WRKY基因有21个可能参与了hrmA基因诱导水稻的抗病反应,43个PRs中亦有15个基因参与。Northern Blot和RT-PCR分析了一些WRKY基因验证阵列的结果表明,这些方法得到的结果基本一致,即WRKY基因家族参与hrmA基因诱导水稻的抗性反应,且这种抗性反应和hrmA基因的表达丰度是相关的。
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