鹿茸多肽对促神经母细胞瘤细胞增殖及抑制其凋亡的相关实验研究

来源 :长春中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhen3071
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目的:通过对神经母细胞瘤细胞的体外培养,将鹿茸多肽作用于神经母细胞瘤细胞,并通过MTT实验、进行流式细胞仪检测以及RT-PCR检测,来分析鹿茸多肽对于神经母细胞瘤细胞在增殖以及凋亡方面的影响,并且以此来进一步探索其鹿茸多肽对促神经母细胞瘤细胞增殖及抑制其凋亡的相关机制,为下一步的实验奠定相关的理论基础。方法:本实验通过对神经母细胞瘤细胞的传代培养,应用MTT法,将鹿茸多肽作用于神经母细胞瘤细胞,测定其生物活性,分析鹿茸多肽溶液浓度与细胞存活率的关系,从而揭示其对促神经母细胞瘤细胞增殖的相关作用。应用流式细胞仪分析神经母细胞瘤细胞的凋亡现象,并进行神经母细胞瘤细胞的RNA提取、PCR扩增后,通过RT-PCR方法检测Bcl-2、Bax表达,从而揭示鹿茸多肽抑制神经母细胞瘤细胞凋亡的相关作用机制。结果:通过MTT细胞活性检测以及细胞损伤试验证明,鹿茸多肽促神经母细胞瘤细胞增殖效果明显,而且鹿茸多肽具有良好的生物活性,通过鹿茸多肽溶液浓度与细胞存活率的线性关系可以看出,随着鹿茸多肽溶液浓度的增加,细胞的存活率呈增长状态:当鹿茸多肽溶液浓度在31.25μg/ml—125μg/ml之间时,细胞存活率的指数进入一个快速上升阶段。当鹿茸多肽溶液剂量浓度在125μg/ml左右时,细胞存活率指数达到相对的高峰值,当鹿茸多肽浓度在125μg/ml—250μg/ml之间时,或者当高于250μg/ml时,细胞存活率的指数进入一个平台期。当鹿茸多肽剂量达到400mg/ml,其凋亡百分数是50.02%;当鹿茸多肽剂量达到800mg/ml,凋亡百分数51.24%,可观察到400mg/ml和800mg/ml的鹿茸多肽对神经母细胞瘤细胞的凋亡具有明显的抑制作用。而通过RT-PCR检测发现Bax蛋白表达量下降,而Bcl-2表达表达量继续上调。结论:鹿茸多肽促神经母细胞瘤细胞增殖效果明显,且鹿茸多肽具有良好的生物活性。鹿茸多肽具有明显抑制神经母细胞瘤细胞凋亡的作用.其抑制细胞凋亡的作用是通过调控凋亡基因的表达,是使Bcl-2表达上调,Bax表达下调而实现的。
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