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针对枯草芽孢杆菌在土传病害防治过程中存在的防治效果不高的问题,在前人研究工作的基础上,通过改变枯草芽孢杆菌生长土壤生长营养条件,改善其在土壤中的繁殖及增强抑菌物质分泌的能力;使用化学诱变剂诱变选育高拮抗活性菌株;得到以下试验结果。
25℃下,在土壤中加入适量营养添加剂,营养添加剂对G3str菌在不灭菌土壤中前5天有一定的增殖作用,菌量达到一个高峰后下降,10d后G3str菌在土壤中主要以芽孢的形态存活。60d后,G3str菌在土壤中仍以106cfu/g土水平存活。G3str菌在土壤中增殖时分泌少量的伊枯草菌素,但快速被分解;同时分泌较多的生物表面活性素,营养添加剂的加入明显促进其分泌。
通过有机硫土壤熏蒸剂“大扫灭”与生防菌枯草芽孢杆菌G3str菌株综合防治土传病害,可提高防治效果。有机硫土壤熏蒸剂“大扫灭”对土壤中细菌、真菌和线虫有较好的灭生作用。生防菌枯草芽孢杆菌G3str菌株,在营养添加剂帮助下,在“大扫灭”熏蒸过的土中有一定的增殖,增殖量大于不熏蒸的自然土。同时,在加入菌剂的前六天中,灭菌土中脂肽和伊枯草菌素检测量高于自然土。盆栽试验结果表明,土壤中添加G3nr菌显著减轻由腐霉引起的茄子猝倒病,土壤熏蒸加强防病效果。土壤熏蒸和生防菌结合有望成为防治土传病害的有效途径。
用诱变剂吖啶橙从G3菌株诱变得到20个突变株。其中Ga1、Ga8、Ga12、Ga13、Ga19的5个突变株在肉汤和PDA平板上形成粘液状菌落,与出发菌株完全不同。PDA平板抑菌圈试验,突变株对植物病原真菌番茄叶霉和黄瓜灰霉产生比野生株G3更大的透明抑菌圈,抗真菌能力大小依次为Ga1>Ga8>Ga19>Ga12>Ga13>G3。其中Ga1菌株对番茄叶霉和黄瓜灰霉菌的抑菌带宽分别是G3的1.71和1.69倍。突变株Ga1抗真菌活性最强,用番茄叶霉为指示菌的生物测定结果表明,突变株Ga1固体培养提取物或液体摇瓶培养提取物的最小抑菌浓度(MIC)和有效抑菌中浓度(EC50)均是G3的3倍左右。Ga1和G3液体连续发酵过程中菌株不同时间分泌伊枯草菌素A含量变化基本一致;Ga1菌株合成伊枯草菌素A的能力较出发菌株增强了21.9%。