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人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)属于疱疹病毒5型,是一种广泛分布的传染性病原体,可引起新生儿(免疫发育不健全)或免疫缺陷人群的生殖泌尿系统、中枢神经系统和肝脏为主的各系统感染,进而导致先天发育缺陷或从轻微无症状感染直到严重缺陷或死亡。HCMV对于免疫不健全人群的危害最大,而且没有可预防的疫苗,只能以更昔洛韦(GCV)等药物进行抗病毒治疗,寻找理想的小动物感染模型就成为了建立疫苗研发和药物筛选平台的关键。由于HCMV的感染具有严格的种属特异性,针对该病毒研究主要使用各种动物(如猴、小鼠、大鼠和豚鼠等)自身的巨细胞病毒或人源化小鼠模拟HCMV对人的感染特性。这些模型和HCMV对人类感染相比较而言,都存在不同程度的差异性,不能作为合适的感染疾病模型用于相关研究。树鼩作为一种体型较小,进化地位以及生理生化特性方面都比啮齿类更接近人的哺乳动物,有望建立HCMV跨物种的树鼩感染模型。本研究首先通过人胚肺成纤维细胞(HEL)成功培养出高滴度的HCMV-Towne毒株,并以改良的细胞空斑法准确测定其病毒滴度为5.8×106PFU/mL,作为后续感染实验的毒株。以胶原酶I消化法成功分离了树鼩的皮肤真皮成纤维细胞(TSDF),在培养过程中优化其培养条件,进一步改善了细胞的生长状态和细胞传代培养时的活力,通过测定该细胞的增殖曲线,反映出树鼩皮肤真皮成纤维细胞可在传代后第2～5 d处于对数生长期,进而可作为后续细胞感染实验的前提条件。利用培养的HCMV Towne-Bac株对树鼩6种原代细胞的感染和阳性检测,最终确定树鼩皮肤成纤维细胞可作为HCMV的感染对象。通过HCMV感染树鼩皮肤的成纤维细胞(TSDF),同时设定HEL和Balb/c小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)分别作为阳性和阴性对照,观察感染后细胞病变发现,Towne能够有效感染TSDF细胞,并且对病毒的反应比HEL更敏感,引起了细胞的大量死亡。通过巢式PCR和荧光定量PCR检测被感染细胞内病毒基因和细胞内的病毒载量,与HEL相比发现,感染24 h后TSDF细胞中ie-1和ul83的拷贝数细胞中处于较低水平,初步认为TSDF不能支持病毒进行高效复制、产生大量子代病毒。Western blot检测病毒特异性蛋白在被感染细胞内的表达与分布情况发现,在TSDF中的IE1和UL44均在24hpi达到最大量,随后逐渐减弱。与HEL相比较,TSDF中的pp65在整个感染过程中几乎维持在同一水平,说明细胞内的病毒量没有发生大的变化,进一步证实TSDF不能够支持HCMV的高效增殖。间接免疫荧光检测病毒IE1在感染细胞中的亚定位发现,HCMV-Towne病毒能够感染并且进入TSDF细胞核内,发生病毒的复制起始活动,但IE1的表达随感染时间而下降,说明病毒的复制处于较低水平综上所述,HCMV-Towne能够跨物种感染树鼩的皮肤成纤维细胞,但从分子和蛋白水平均证实Towne在TSDF中只发生短暂的复制,但复制水平较低且不可持续。基于此,我们初步认为TSDF是HCMV感染的半容许性细胞。研究证实了 HCMV对树鼩皮肤成纤维细胞的感染性,为进一步研究HCMV对TSDF的感染机制奠定了基础。