【摘 要】
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目的:研究BIRC5基因转染的BMSCs与XACB复合培养构建组织工程骨对早期SONFH的治疗效果。方法:采用全骨髓培养法分离培养SD大鼠BMSCs,并鉴定其表型及多向分化潜能;将BMSCs和XACB复合培养,检测生物相容性;BIRC5慢病毒转染BMSCs,q PCR及Western Blot检测转染后BIRC5表达情况;采用Di R标记BIRC5转染的BMSCs,随后将BMSCs与XACB进行复
【基金项目】
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国家自然科学基金（81860387）,题目:PARK7增强BMSCs抗氧化应激对BMSCs/bFGF移植修复早期ANFH的作用及机制
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目的:研究BIRC5基因转染的BMSCs与XACB复合培养构建组织工程骨对早期SONFH的治疗效果。方法:采用全骨髓培养法分离培养SD大鼠BMSCs,并鉴定其表型及多向分化潜能;将BMSCs和XACB复合培养,检测生物相容性;BIRC5慢病毒转染BMSCs,q PCR及Western Blot检测转染后BIRC5表达情况;采用Di R标记BIRC5转染的BMSCs,随后将BMSCs与XACB进行复合培养构建组织工程骨;采用尾静脉注射脂多糖联合臀肌注射甲强龙法构建大鼠SONFH模型,根据实验条件,大鼠随机分为五组（每组18只）:A组（SONFH+单纯钻孔减压）;B组（SONFH+XACB）;C组（SONFH+XACB/BMSCs）;D组（SONFH+XACB/BMSCs/Lv-GFP）;E组（SONFH+XACB/BMSCs/Lv-BIRC5/GFP）,经手术钻孔减压刮除坏死骨后,按照实验分组将组织工程骨填充到骨缺损区。术后当天及术后第3天使用小动物成像仪检测BMSCs在移植区的存活率;在术后4周、8周、12周时,采用Micro-CT观察各组骨坏死修复情况、HE染色及Masson染色观察新骨形成,评估BIRC5转染的BMSCs与XACB复合培养构建的组织工程骨对早期SONFH的治疗效果。结果:1.培养出形态均一、纯度较高、有多向分化潜能的大鼠BMSCs。2.BMSCs与XACB生物相容性好,BMSCs可在XACB表面正常生长。3.成功获得高表达BIRC5的大鼠BMSCs稳定株,BIRC5转染组的BIRC5m RNA以及BIRC5蛋白表达显著高于空病毒组,表明BIRC5成功转染BMSCs。4.术后当天,C-E各组间荧光强度值之间无显著差异;术后3天时,D组与C组骨坏死区荧光强度无显著差异,E组骨坏死区荧光强度值显著强于D组（P<0.05）,结果表明BIRC5可促进移植区BMSCs的存活。5.Micro-CT观察骨坏死修复情况:在术后不同时间点（4周、8周、12周）,Micro-CT图像显示,E组骨缺损区修复效果均优于D组,C组及D组间修复效果无明显差别,股骨头各指标表明,E组骨矿盐密度、骨小梁厚度及骨小梁数目明显大于D组（P<0.05）,C组及D组各指标间差异无统计学意义,结果表明BIRC5转染组对股骨头坏死治疗效果明显。6.HE及Masson染色评估新骨形成:在术后不同时间点（4周、8周、12周）,E组骨缺损区新骨形成效果明显优于D组,C组及D组间新骨形成无明显差别,在术后12周时,E组修复效果最明显,植入的组织工程骨已被完全吸收,由成熟组织所替代,可见大量骨陷窝,骨小梁结构完整,结果表明BIRC5转染组对坏死区新骨形成效果显著。结论:BIRC5转染BMSCs与XACB复合培养构建的组织工程骨对早期SONFH具有良好的治疗效果,为临床上股骨头坏死的治疗提供了可靠的实验依据。
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