目的:(1) 通过观察抗兔Bcl-2抗体对兔角膜内皮细胞凋亡情况的影响,探讨Bcl-2对角膜内皮细胞凋亡的调控关联性:(2) 研究层粘连蛋白对兔角膜内皮细胞bcl-2表达的影响。 方法:(1) 倒置显微镜观察体外培养的兔角膜内皮细胞形态及数目变化,计数每天的细胞数目并绘制细胞生长曲线;分别在基础培养液和添加抗兔Bcl-2抗体的培养液中培养兔角膜内皮细胞24h,紫外线诱导角膜内皮细胞凋亡,再培养24h,流式细胞技术和电镜技术检测并比较两组细胞凋亡情况。(2) 利用ELISA方法探索层粘连蛋白对兔角膜内皮细胞的最适浓度;然后分别在基础培养液和添加层粘连蛋白的培养液中培养内皮细胞12h,利用免疫组化技术和ELISA检测分析兔角膜内皮细胞bcl-2表达情况。 结果:(1) 细胞生长曲线图提示细胞生长符合一般细胞生长规律;流式细胞技术检测显示抗体处理组凋亡细胞比例显著高于对照组,提示Bcl-2可以抑制角膜内皮细胞的凋亡,增强其活性。光镜下,对照组细胞分布呈花瓣样、团状分布,细胞密度适中,细胞紧密贴附培养皿底部,细胞边界清晰,细胞核大小一致,清晰可见;与对照组相比,抗体处理组细胞生长不良,部分细胞不能与培养皿底部紧密贴附,漂浮于培养液表面,细胞胞浆内空泡多见,胞核形状大小不一致,边界稍模糊;透射电镜发现抗体处理组有明显的凋亡表现,如染色质边集,核浓缩,出现凋亡小体等。(2) 利用ELISA方法初步显示层粘连蛋白可以促进兔角膜内皮细胞bcl-2表达并有剂量依赖关系,最终测得层粘连蛋白对兔角膜内皮细胞促进bcl-2表达的最适作用浓度为60mg/L;免疫组化评分显示层粘连蛋白组有强阳性表达,正常对照组有弱阳性表达;ELISA检测兔角膜内皮细胞bcl-2表达情况显示层粘连蛋白可以促进兔角膜内皮细胞bcl-2表达。 结论:(1) Bcl-2能够保护角膜内皮细胞,减少细胞的凋亡,增强其活性;(2) 层粘连蛋白可以促进兔角膜内皮细胞bcl-2表达。