NDRG1调控结直肠癌细胞骨架重构的新机制及其在转移中作用的研究

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目的探讨NDRG1基因蛋白在结直肠癌组织中的表达情况及意义,揭示NDRG1调控结直肠癌细胞骨架重构的新机制及其在结直肠癌侵袭转移中的分子机制。方法(1)应用免疫组织化学法检测240例结直肠癌组织NDRG1蛋白表达,分析其与结直肠癌患者临床病理特征及预后的相关性。(2)通过划痕实验及Traswell小室模型检测NDRG1对结直肠癌细胞系HT29和HCT116迁移能力的影响。(3)应用蛋白免疫印迹法分析NDRG1对结直肠癌细胞骨架蛋白F-actin重组的影响。(4)通过蛋白免疫印迹法分析NDRG1对结直肠癌细胞中PAK1和pMLC2表达的影响,以PAK1抑制剂验证PAK1表达对pMLC2的影响。(5)检测结直肠癌组织中PAK1蛋白表达,验证其是否与NDRG1表达相关。结果(1)与对应的癌旁组织相比结直肠癌组织中NDRG1蛋白表达下降。(2)结直肠癌组织中NDRG1的表达与患者的病理分期,总生存期及无瘤生存期相关,可望作为评判结直肠癌患者预后的独立风险因子。(3)通过划痕实验和transwell小室实验,可得知NDRG1对肿瘤细胞的迁移起着抑制作用。(4)通过免疫印迹及免疫荧光法验证NDRG1通过调节F-actin表达抑制结直肠癌细胞迁移能力。(5) NDRG1通过激活PAK1表达影响pMLC2表达。(6)结直肠癌组织中NDRG1蛋白表达与PAK1表达呈正相关。结论(1)NDRG1是一种肿瘤抑制基因。(2) NDRG1是评判结直肠癌患者,尤其是II期、III期结直肠癌患者预后的风险因素之一。(3)NDRG1发挥肿瘤抑制作用的分子机制可能是通过激活PAK1表达从而抑制MLC2磷酸化,进而抑制以F-actin为主的细胞骨架重构而抑制结直肠癌迁移。
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