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目的首先观察处于不同自然史慢性HBV感染患者外周血T淋巴细胞表面LAG-3表达的变化,探讨免疫抑制性分子LAG-3在T细胞的表达变化与处于不同自然史慢性HBV感染者体内病毒载量、肝脏损伤程度、HBV血清学标志物等的关系;同时,研究CD8+LAG-3+T细胞比例变化与处于不同自然史慢性HBV感染者外周血单个核细胞在HBV抗原的刺激下CD8+T细胞功能的关系。方法1、选取处于慢性HBV感染IT期、IC期、LR期各30例,健康体检者30例为正常对照。应用流式细胞术检测外周血CD8+T细胞和CD4+T细胞表达LAG-3的比例;免疫分析法、生化分析法和实时荧光定量PCR分别检测患者肝脏功能、HBV血清学标志物和HBV DNA载量。采用Mann-Whitney U test分析各组间T细胞LAG-3表达率的差异;Spearman等级相关性分析各期慢性HBV感染患者外周血T细胞LAG-3表达阳性率与血清ALT、HBV DNA和HBeAg水平的相关性。2、选取IT、IC期、LR期各10例,经过HBV S抗原、C抗原、E抗原刺激培养为实验组,HCMV抗原和PMA刺激作为特异性抗原和非特异性刺激对照组,应用流式细胞术膜表达和胞内分子表达检测技术检测外周血CD8+T细胞表达LAG-3、HLA-DR、IL-4、IFN-γ、颗粒酶B阳性的比例,采用Mann-Whitney U test分析各组间CD8+T细胞LAG-3、HLA-DR、IL-4、IFN-γ、颗粒酶B的变化表达的差异。3、选取5例IT期感染者外周血单个核细胞,采用抗LAG-3单克隆抗体封闭阻断,观察阻断前后CD8+T细胞LAG-3、HLA-DR、IL-4、IFN-γ、颗粒酶B及T细胞的增殖变化,Wilcoxon配对秩和检验分析结果。结果1、慢性HBV感染者外周血LAG-3+CD8+T细胞的比例较HC组显著增高,且处于IT期的感染者外周血LAG-3+CD8+T细胞的比例明显高于IC期或LR期感染者及HC组。处于IC期感染者外周血LAG-3+CD8+T细胞比例与感染者血清中ALT水平呈显著负相关;IT期感染者外周血LAG-3+CD8+T细胞比例与血清中HBeAg水平呈正相关。然而,不同自然史慢性HBV感染者外周血LAG-3+CD4+T细胞比例和LAG-3+CD8+T细胞比例与血清HBV DNA水平无相关性。2、HBV抗原刺激后,IT期CD8+T细胞表面LAG-3的表达显著高于IC期和LR期,而CD8+T细胞胞内表达颗粒酶B的比例却显著低于其他两期;IC期感染者CD8+T细胞表面HLA-DR的表达和胞内表达IL-4、IFN-γ的比例显著高于IT期。阻断LAG-3后外周血CD8+T细胞表达LAG-3分子的比例明显低于未阻断组;而HLA-DR分子的表达比例明显高于未阻断组;CD8+T淋巴胞内细胞因子IFN-γ、IL-4、颗粒酶B表达的比例阻断组明显高于未阻断组。结论LAG-3在慢性HBV感染者外周血CD8+T细胞高表达,尤其是IT期感染者CD8+T细胞高表达,是造成CD8+T细胞细胞因子产生和增殖功能低下的重要因素,可能也是HBV在肝脏长期复制的原因之一。阻断或抑制T细胞LAG-3的表达或信号通路,将有助于慢性HBV感染者体内HBV的彻底清除。