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该研究根据已发表的ChIL-18成熟蛋白(mature ChIL-18,mChIL-18)的cDNA基因序列,设计一对特异性引物,应用反转录-聚合酶链式反应技术从脂多糖(LPS)刺激10小时活化的马立克氏病成淋巴细胞样细胞系MDCC-MSB1的cDNA中扩增出编码鸡IL-18成熟活性蛋白的全长基因,对扩增片段进行T-A克隆,经PCR、酶切鉴定及测序验证,成功获得ChIL-18成熟蛋白完整基因的克隆.序列分析表明,所克隆到的ChIL-18成熟蛋白编码基因包括终止密码子在内全长为510bp,含有一个开放阅读框架,这与Schneider等(2000)报道的结果完全一致.鸡与人和其他11种动物的IL-18成熟蛋白基因序列分析表明,IL-18成熟蛋白基因存在种的多样性,亲缘关系越近,同源性越高.在克隆到编码ChIL-1 8成熟蛋白的基因后,将此基因亚克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组质粒并进行确证性序列测定.然后将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)株中并用IPTG于37℃诱导培养获得表达,表达形式为包涵体.经过优化选择确定了重组ChIL-18(Recombinant ChIL-18,rChIL-18)蛋白高效表达的最适参数,即当IPTG浓度为0.2 mmol/L,诱导时间为4h时,表达水平最高,凝胶薄层灰度扫描显示表达的融合蛋白约占菌体蛋白的32％.诱导菌体裂解物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后,用兔抗GST抗体进行Western-blotting试验,结果确证了GST-mChIL18融合蛋白的表达,表达的鸡IL-18融合蛋白分子量约为44kDa,并对其进行了亲和纯化.将表达产物从凝胶中回收,免疫4周龄小白鼠,三次免疫后,采血分离血清.用所得抗血清对SDS-PAGE后的诱导菌体裂解物进行Western blot检测,结果表明制备的多克隆抗体与ChIL-18具有良好的反应性.将ChIL-1 8成熟蛋白基因的完整ORF进一步克隆入真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中,重组质粒pcDNA3.1TOPO-mChIL18在脂质体作用下转染鸡胚成纤维细胞(chicken embryonic fibroblast,CEF),在转染后24、48、72小时,用pGEX-mChIL18原核表达产物制备的抗血清对pcDNA3.1TOPO-mChIL18转染的CEF进行间接免疫荧光试验检测,结果检测到了mChIL-18在CEF中的表达,该试验也使mChIL-18基因在原核和真核系统中的表达得到了相互验证.所有以上实验结果为下一阶段ChIL-18生物学特性及其应用的研究打下了坚实基础.