目的用异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白-孕酮复合物(P-BSA-FITC)染色,运用直接荧光标记及流式细胞技术检测子宫内膜癌Ishikawa细胞膜孕激素受体表达情况,通过免疫印记杂交技术检测子宫内膜癌Ishikawa细胞内p-ERK表达的变化,以期证实子宫内膜癌细胞中孕激素膜受体的存在,进一步完善孕激素的非基因作用机制。探讨荧光标记孕酮在孕激素非基因作用机制研究中的应用价值。方法1、用异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白-孕酮复合物作用于子宫内膜癌Ishikawa细胞,荧光显微镜下观察细胞中荧光标记部位。2、流式细胞仪检测不同浓度的异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白-孕酮复合物作用下,在不同时点时细胞荧光标记情况。3、免疫印迹杂交技术检测不同浓度异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白-孕酮复合物作用不同时间时,子宫内膜癌Ishikawa细胞中p-ERK表达的变化。结果1、P-BSA-FITC作用于子宫内膜癌Ishikawa细胞后,在细胞膜上可见荧光染色,而核内未见荧光染色。用BSA-FITC代替p-BSA-FITC,未见荧光染色细胞。2、流式细胞仪检测结果显示,不同浓度的P-BSA-FITC作用下,在各时点的荧光标记细胞数均高于空白对照组,其中以25ug/ml组荧光标记率最高。3、P-BSA-FITC作用下,细胞内p-ERK水平受到抑制,在作用5分钟时抑制作用最强。结论1、在子宫内膜癌Ishikawa细胞膜表面存在着孕激素膜受体,其与孕激素的结合能力大小与孕激素的浓度和作用时间有关。2、孕激素可通过细胞表面的膜受体抑制MAPK信号传导通路,发挥孕激素的非基因作用。3、孕激素不仅可以通过经典的基因作用在子宫内膜癌治疗中发挥作用,而且可以通过抑制子宫内膜癌细胞中MAPK/ERK信号传导途径,在子宫内膜癌的治疗中发挥重要作用。