原生质体融合构建直接转化淀粉产燃料酒精的菌株

来源 :湖北工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:john20002000
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K氏酵母及酿酒酵母可利用可发酵性糖产酒精,糖化酵母则可以产糖化酶,分别以K氏酵母与糖化酵母、酿酒酵母与糖化酵母为亲本,采用先紫外线单亲灭活糖化酵母原生质体,再用高渗缓冲液配制的PEG化学促融剂促融的原生质体融合技术进行属间融合,以构建可直接转化淀粉产酒精的菌株。同时对酵母原生质体形成和再生条件进行了探索:取培养6-8h的单倍体,在30℃下,2.0%的蜗牛酶酶解1.0h时,均可获得高于92%的形成率及6.5%的再生率。依此条件制备好原生质体,经紫外线灭活糖化酵母后用PEG(6000MW)促融,K氏酵母与糖化酵母融合频率为7.3×10-6,酿酒酵母与糖化酵母融合频率为8.4×10-6。融合后涂布选择性再生平板,筛选多次共获得13株稳定融合子。对融合子作进一步的鉴定,包括细胞大小、DNA含量、淀粉利用率及产酒精能力等方面的测定,并与亲株作比较,最终获得一株性状稳定、酒精转化率高的融合子KS-5,在含18.0%的可溶性淀粉发酵液中,酒度可达7.0(v/v)。同时确定其基本最适生长条件为:接种量2.0×107个/ml,温度30℃,pH5.0;而在发酵阶段最适发酵条件为:接种量2.0×107个/ml,发酵温度32℃,pH4.0。最后对KS-5的生料发酵工艺条件进行了初步的研究,最佳发酵温度为32℃,最佳PH为4.0,最佳发酵时间为144小时,发酵周期与K氏酵母相同,在最佳条件下发酵,酒分达到7.2%(v/v),残总糖为1.08%,淀粉出酒率为58.6%,在生物发酵生产酒精方面,具有良好的应用前景。
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