论文部分内容阅读
目的：Neuroserpin作为一种功能性的丝氨酸蛋白酶抑制剂,在中枢发挥重要的神经保护功能,并且其神经保护功能是否跟其组织型纤溶酶原激活剂的抑制活性相关颇受争议。本课题旨在探讨NSP对视网膜缺血再灌注损伤的保护功能及其保护功能是否依赖于对组织型纤溶酶原激活剂的抑制。方法：本课题主要使用了野生鼠(WT)和tPA基因敲除鼠(tPA-/-)。先采用微量注射器对成年鼠玻璃体腔注射lul的NSP或者时等体积胎牛血清(BSA)对照液,然后采用前房灌注系统急性升高眼内压至120mmhg并持续60mins,建立视网膜缺血再灌注损伤模型。在建模之后1天、7天采用ERG技术对缺血再灌注损伤后视网膜功能进行评估,采用TUNEL染色对视网膜结构进行评估,同时采用蛋白印记(western blot)技术对视网膜caspase-3、cleaved caspase-3、caspase-9、 cleaved caspase-9、caspase-8、cleaved caspase-8、PARP及cleaved PARP进行测量。最后,采用免疫荧光技术和western blot技术探究NSP在视网膜缺血灌注注损伤中的表达及其表达的分布。结果：通过实验发现,视网膜缺血再灌注损伤导致严重的视网膜功能损害和视网膜神经元凋亡,而预先玻璃体腔预注射NSP显著保护视网膜损伤,而且NSP的视网膜保护功能在WT和tPA-/-鼠中相似。同时实验发现在缺血损伤的视网膜中,caspase-3, caspase-9、PARP显著激活,而NSP能抑制其激活,NSP对这些蛋白的抑制在WT和tPA-/-鼠中也是相似的。NSP在正常视网膜中基本上不表达,而在视网膜缺血再灌注损伤后显著表达并主要分布于视网膜神经节细胞。结论：因此我们提出,NSP可以保护视网膜缺血再灌注损伤,这种保护功能不依赖于对组织型纤溶酶原激活剂的抑制,而且可能是通过抑制caspase-3激活来发挥视网膜保护功能。